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當前位置:北京諾博萊德科技有限公司>>生化試劑>>三羧酸循環系列>> BK6017順烏頭酸酶活性檢測試劑盒 三羧酸

順烏頭酸酶活性檢測試劑盒 三羧酸

參  考  價面議
具體成交價以合同協議為準

產品型號BK6017

品       牌NobleRyder/諾博萊德

廠商性質經銷商

所  在  地北京市

更新時間:2025-07-17 15:08:43瀏覽次數:167次

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供貨周期 現貨 規格 50T/48S
貨號 BK6017 應用領域 環保,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥
主要用途 順烏頭酸酶活性檢測試劑盒
順烏頭酸酶(aconitase),三羧酸循環中的酶,催化檸檬酸轉變為異檸檬酸。檸檬酸本身不易氧化,在順烏頭酸酶作用下,通過脫水與加水反應,使羥基由β碳原子轉移到α碳原子上,生成易于脫氫氧化的異檸檬酸,為進一步的氧化脫羧反應作準備。
順烏頭酸酶活性檢測試劑盒 三羧酸


順烏頭酸酶(ACO活性檢測試劑盒說明書

分光光度法 50 /48 

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義:

順烏頭酸酶(aconitase),三羧酸循環中的酶,催化檸檬酸轉變為異檸檬酸。檸檬酸本身不易氧化,在順烏頭酸酶作用下,通過脫水與加水反應,使羥基由β碳原子轉移到α碳原子上,生成易于脫氫氧化的異檸檬酸,為進一步的氧化脫羧反應作準備。

測定原理:

ACO 催化檸檬酸轉化成異檸檬酸,異檸檬酸氧化脫羧將 NAD+ 還原生成NADH,導致 340nm 處光吸收上升。

順烏頭酸酶活性檢測試劑盒   三羧酸

組成:

產品名稱

BK6017-50T/48S

Storage

試劑一:液體

50ml

-20℃

試劑二:液體

10ml

-20℃

試劑三:液體

1ml

-20℃

試劑四:液體

60ml

4℃

試劑五:液體

5ml

4℃

試劑六:粉劑

1

-20℃

試劑七:粉劑

1

4℃

說明書

一份

 

試劑六:粉劑×1 支,-20℃保存;臨用前加 3ml 蒸餾水充分溶解;現配現用

試劑七:粉劑×1 支,4°保存;臨用前加 36ml 試劑四充分溶解;

工作液:臨用前在 36ml 試劑七中加入 3ml 蒸餾水、3ml 試劑四、3ml 試劑五、3ml 試劑六充分混勻


具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準


自備儀器和用品:

紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1ml 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

樣本的前

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

1 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細胞,加入 1ml 試劑一和 10μl 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

2 將勻漿轉入離心管內 600g,4℃離心 5min

3 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心 10min

4 上清液即胞漿提取物,可用于測定胞質順烏頭酸酶活性

5 在步驟④的沉淀中加入 200μl 試劑二和 2μl 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3 秒,間 10 秒,重復 30 次),用于線粒體順烏頭酸酶活性測定

測定步驟:

1、分光光度計預熱 30min 以上,調節波長至 340nm,蒸餾水調零。

2、樣本測定

(1)將工作液,置于 37℃(哺乳動物) 25℃(其它物種)水浴 10min;現配現用;若分次用將工作液分裝后于-20°保存,一星期內可用。

(3) 1ml 石英比色皿中加入 100μl 樣本 900μl 工作液,混勻,立即記錄 340nm  20s 時的吸光值A1 和

3min20s 后的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1

ACO 活性計算:

用石英比色皿測定的計算公式如下

(1) 按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:每mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活性單位。

ACO 活性(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V ) ÷T=536×ΔA÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計算

單位的定義:每g 組織每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活性單位。

ACO(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=108×ΔA÷W

(3) 按細菌或細胞密度計算

單位的定義:每 1 萬個細菌或細胞每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活性單位。

ACO 活性(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.722×ΔA

V 反總:反應體系總體積,0.001 L;ε:NADH 摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm V 樣:加入樣本體積,0.1 ml;V 樣總:加入提取液體積,0.202 ml;T:反應時間,3min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/ml;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500 萬。

順烏頭酸酶活性檢測試劑盒   三羧酸



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