諾博萊德 核糖體提取試劑盒

核糖體提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P4936

產(chǎn)品名稱(chēng)：核糖體提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱(chēng)：核糖體提取試劑盒

規(guī)格：

50T ; 100T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P4936 核糖體提取試劑盒

適用樣本：動(dòng)物細(xì)胞/組織

產(chǎn)品介紹

核糖體是細(xì)胞內(nèi)一種核糖核蛋白顆粒(ribonucleoprotein particle),主要由 RNA 和蛋白質(zhì)構(gòu)成, 其惟一功能是按照 mRNA 的指令將氨基酸合成蛋白質(zhì)多肽鏈,所以核糖體是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成的分子機(jī)器。核糖體無(wú)膜結(jié)構(gòu)，主要由蛋白質(zhì)（40%）和 RNA（60%）構(gòu)成核糖體按沉降系數(shù)分為兩類(lèi),一類(lèi)（70S）存在于細(xì)菌等原核生物中,另一類(lèi)（80S）存在于真核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。他們有的漂浮在細(xì)胞內(nèi)，有的結(jié)集在一起。

核糖體提取試劑盒可用于各種動(dòng)物細(xì)胞和實(shí)體軟、硬組織樣本的核糖體的提取。

注：

試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完，長(zhǎng)期不用可以-20℃保存。

需自備試劑及設(shè)備

離心機(jī)、振蕩器、勻漿機(jī)/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒、1×PBS 緩沖液、離心管、吸頭、一次性手套、細(xì)胞篩

使用方法（僅供參考）：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

2. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

3. 實(shí)驗(yàn)中所有液體以及器具均應(yīng)該用 DEPC 處理。用 0.1%的 DEPC 處理 12 小時(shí)然后高壓。

4. 下游用于蛋白質(zhì)類(lèi)實(shí)驗(yàn)的話可以不用 DEPC 處理。

5. 細(xì)胞最好采用新鮮收集的，或者收集后立即置于-80℃保存的樣本。

6. 最好使用標(biāo)準(zhǔn) Dounce 勻漿器勻漿，如果沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn) Dounce 勻漿器，用普通玻璃勻漿器勻漿也可，但是核糖體回收率可能會(huì)下降。

二、細(xì)胞核糖體提取：

1. 取 1-2×10⁷個(gè)細(xì)胞，在 4℃，500-1000×g 條件下離心 5 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。

2. 用冷 PBS 洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

3. 加入 500μl-1ml 冷的試劑 A，置冰上 10 分鐘。

4. 用 Dounce 勻漿器勻漿 20-30 下。

5. 將勻漿液在 4℃，1000×g 條件下離心 5 分鐘。棄沉淀，收集上清。

6. 將上清在 4℃，20000×g 條件下離心 10 分鐘，棄沉淀，收集上清。

7. 將上清在 4℃，100000×g -120000×g 條件下離心 60 分鐘。棄上清，收集沉淀。

8. 在沉淀中加入 400μl 冷的試劑 B，混勻。

9. 在 4℃，100000×g -120000×g 條件下離心 60 分鐘。

10. 棄上清，沉淀用核糖體保存液重懸。

11. 即得到核糖體樣品，置冰箱-80℃凍存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

三、組織核糖體提取：

1. 取 50-100mg 新鮮動(dòng)物組織樣本，用 PBS 洗滌干凈。

2. 用剪刀盡可能剪碎，用冷 PBS 洗滌兩次。

3. 加入 500μl-1ml 冷的試劑 A，置冰上 10 分鐘。

4. 用 Dounce 勻漿器充分勻漿 20-30 下，至無(wú)明顯固體團(tuán)塊。然后在 4℃，1000×g 條件下離心 5分鐘。

5. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。

6. 在 4℃，20000×g 條件下離心 10 分鐘，棄沉淀，收集上清。

7. 將上清在 4℃，100000×g -120000×g 條件下離心 60 分鐘。棄上清，收集沉淀。

8. 在沉淀中加入 400μl 冷的試劑 B，混勻。

9. 在 4℃，100000×g -120000×g 條件下離心 60 分鐘。

10. 棄上清，沉淀用核糖體保存液重懸。

11. 即得到核糖體樣品，置冰箱-80℃凍存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：

(1) 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以?xún)?yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

(2) 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

(3) 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

(4) 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

(5) 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

(6) 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

核糖體提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

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