氧化型谷胱gan肽含量測定試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

氧化型谷胱gan肽含量測定試劑盒

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

GSH/GSSG 是細胞內最重要的氧化還原對之一。因此，測定細胞內 GSH 和GSSG 含量以及GSH/GSSG比值，能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態，也是谷胱gan肽氧化還原循環的主要指標之一。

測定原理：

利用 2-VP 法測GSSG 含量。

組成：

試劑五： 液體 30μl×1 瓶，-20℃保存。臨用前加入 0.6 ml 試劑三稀釋，4℃保存。試劑六：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 40 ml 試劑三溶解，現配現用。

自備儀器和用品：

可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、1ml 玻璃比色皿和蒸餾水。

粗酶液提取：

組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清液（如上清不清澈，再離心 3min）待測。

細菌、真菌：按照細胞數量（104 個）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；8000g 4℃離心 10min，取上清液（如上清不清澈，再離心 3min）的蒸餾水混勻待測。

血清等液體：直接測定。

測定操作:

分光光度計預熱 30 min，調節波長到 412 nm，蒸餾水調零。

試劑三置于 25℃（一般物種）或者 37℃（哺乳動物）水浴中保溫 30min。

測定管：取 1 ml EP 管，加入 100 μ L 上清液，5μ L 試劑二，蓋緊后混勻，置于 37℃水浴 30min；依次加入 100 μ L 試劑四，10 μ L 試劑五，700 μ L 試劑六，迅速混勻后，立即測定 30 s 和 150 s 光吸收A1 和A2，計算ΔA=A2-A1。

GSSG 含量計算公式:

1、標準條件下測定的回歸方程為 y=0.0276x-0.0011；x 為標準品濃度（nmol/ml），y 為吸光值(ΔA)。

2、 按蛋白濃度計算

GSSG（nmol/mg prot）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V 樣÷(V 樣×Cpr)

=36.23×(ΔA+0.0011)÷Cpr

3、按樣本鮮重計算

GSSG（nmol /g 鮮重）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W)

=36.23×(ΔA+0.0011)÷W

4、按細胞數量計算

GSSG（nmol/104 cell）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×細胞數量)

=36.23×(ΔA+0.0011)÷細胞數量

5、按照液體體積計算 GSSG（nmol/ml）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V 樣÷V 樣

=36.23×(ΔA+0.0011)

V 樣：反應中加入樣本體積，0.1ml；V 樣總：加入提取液體積， 1ml；W：樣品質量，g，Cpr：樣本蛋白濃度（mg/ml）

注意事項：

提取過程中去掉蛋白質，所以提取液不能用于測定蛋白含量。

臨用前配制的試劑配好后 4℃保存，2 天內使用完畢。

最di檢出限為 0.1μmol/L。

反應溫度.嚴格來說，為保證重復性，應在 25℃下進行反應。

反應時間需精確控制，否則會影響反應速率計算，產生較大誤差。

樣品中的GSSG 濃度盡可能低一些，否則反應速率太大，沒法控制，所以稀釋倍數要盡量大些。