諾博萊德 植物細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)提取試劑盒 蛋白提取

NobleRyder P5125 植物細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)提取試劑盒-酶法

產(chǎn)品貨號(hào)：P5125

產(chǎn)品名稱：植物細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)提取試劑盒-酶法

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：植物細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)提取試劑盒-酶法

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5125 植物細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)提取試劑盒-酶法

適用樣本：植物

注：

1. 試劑盒2-8℃保存，開蓋后組份按要求條件保存。

2. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡介：

植物細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細(xì)胞和各種實(shí)體植物組織，如葉片、根、種子等植物組織中提取細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)。提取過程簡單方便，可在 1 小時(shí)內(nèi)完成。制備的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒采用酶法提取，酶法提取制備的回收率提高，純度高，保持天然活性，但是耗時(shí)較長。

非酶法的提取試劑盒提取過程簡單方便，速度快，可在1 小時(shí)內(nèi)完成，而且絕少交叉污染，但是回收率相比酶法較低。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒，對(duì)提取速度沒有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。請(qǐng)根據(jù)實(shí)際需要選擇試劑盒。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、渦旋混勻器、Dounce勻漿器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、離心管、吸頭、細(xì)胞篩（100um）、一次性手套

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1、旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

2、實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。

3、可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑。

二、操作步驟

1、取洗凈擦干后并去除葉梗和粗脈的 100-200mg 植物組織樣本用shou術(shù)剪刀盡可能剪碎（也可用鋒利的刀片劃成盡可能小的碎片）。

2、加入500ul 洗滌液A 充分混勻。

3、在 30℃條件下靜置 15 分鐘。

4、在2000×g 條件下離心10 分鐘，棄上清，收集沉淀。

5、在沉淀中加入500ul 提取液B，充分混勻。

【注】：

①培養(yǎng)細(xì)胞1000×g 條件下離心5 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞后用PBS洗滌2 次，然后直接加入提取液B 重懸。

②大約每300ul 細(xì)胞壓積中加入1ml 提取液B。

③根據(jù)實(shí)際樣本體積調(diào)整提取液用量，一般試劑是樣本體積的2-3 倍，充分淹沒樣本即可。

6、將提取液B 樣本懸液置振蕩器上37℃-45℃或室溫振蕩24-72 小時(shí)。

【注】：

①使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。沒有振蕩條件也可以不振蕩，中間每隔幾小時(shí)用移液器吹打混勻即可。

②根據(jù)下游核和胞質(zhì)的應(yīng)用選擇合適的溫度，最高溫度為55℃時(shí)制備速度最快。但是溫度過高會(huì)影響樣本活性，請(qǐng)根據(jù)下游應(yīng)用選擇溫度。

③不同類型的植物樣本需要處理的時(shí)間差異較大。擬南芥較易處理，鮮嫩葉片較易處理，年齡小的樣本處理時(shí)間短。部分細(xì)胞壁較厚的植物類型可能需要處理更長時(shí)間。可以延長至 72 小時(shí)以上處理以提高得率。

7、在2000×g 離心5 分鐘，棄上清，收集沉淀。

【注】：

①有條件的話最好用100um 細(xì)胞篩網(wǎng)過濾提取液 B 處理液后，收集濾液再離心。

②沒有細(xì)胞篩可以不過濾。

8、用PBS 洗滌沉淀一次。（在2000×g 離心 5 分鐘）

9、在沉淀中加入500ul 試劑C 重懸沉淀，充分混勻。用勻漿機(jī)/勻漿器勻漿。

10、置 4℃振蕩20-30 分鐘。

①使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

②沒有振蕩條件也可以不振蕩，在 2-8℃靜置，稍微延長處理時(shí)間，中間每隔幾小時(shí)用移液器吹打混勻即可。

11、在 4℃，800×g 力條件下離心5 分鐘。

12、移除上清至另一干凈離心管。上清為細(xì)胞質(zhì)部分，沉淀為細(xì)胞核。

13、用相應(yīng)的緩沖液重懸細(xì)胞核沉淀，將兩個(gè)樣本置冰箱備用或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹di清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

 植物細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)提取試劑盒 蛋白提取

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