性做久久久久久坡多野结衣-性做久久久久久久久浪潮-性欲影院-性影院-国产精品线路一线路二-国产精品兄妹在线观看麻豆

| 注冊| 產品展廳| 收藏該商鋪

行業產品

17321051213
當前位置:
上海喆圖科學儀器有限公司>>公司動態>>怎樣用恒溫培養箱做提蛋白及蛋白定量的濃度實驗?

產品展示

更多
  • 科研電熱恒溫水槽主要用于實驗室中蒸餾,干

  • 化工電熱恒溫水槽主要用于實驗室中蒸餾,干

  • BOD系列培養分析系統集成BOD培養箱和

  • HWS系列恒溫恒濕稱重系統,又稱濾膜平衡

  • GCO系列三氣培養箱可通過控制CO?、O

  • 單列單孔電熱恒溫水浴鍋是輔助恒溫實驗儀器

怎樣用恒溫培養箱做提蛋白及蛋白定量的濃度實驗?

閱讀:2716        發布時間:2017/9/6
分享:

1、吸棄培養皿中的培養液。

2、往培養皿中加入2ml 冷的PBS輕輕蕩洗2~3次,zui后一次,吸干培養皿中的PBS。

3、每個培養皿中加入70μl(以FLS細胞為例)裂解液。

裂解液的配置:

RIPA裂解液:蛋白酶/磷酸酶抑制劑混合物:RIPA裂解液(中)B液=100:1:1

(配置時實際配置的體積需比理論值高出幾十微升)

4、將加入裂解液的培養皿輕輕搖晃,使裂解液與貼壁細胞充分接觸,放入—70℃的冰箱,冷凍10分鐘。

5、裂解完后,用干凈的刮刀將細胞刮于培養皿的一處(動作要快,每個皿控制在3min),然后用槍將細胞碎片和裂解液移至1.5ml 離心管中。(整個操作盡量在冰上進行)

6、將離心管置于小型離心機上渦旋一下,然后置于4℃冰箱放置30min。(期間從冰箱拿出再進行渦旋一次)

7、將離心管放入高速離心機,于4度下12000rpm 離心5min。(提前開離心機預冷)

8、取出離心管,吸取上清液,上清液即蛋白液,對其進行定量,轉移至新的1.5ml離心管。(定量需用的槍。)

9、對提取的上清液進行蛋白濃度的定量

蛋白定量的過程

①取干凈的96孔板,進行區域選擇板底掃描即讀板(切勿用手觸摸板底)

②首先在96孔板中加入18ul的PBS(做標準曲線的PBS)

③在18ul的PBS中加入2ul的樣品

④zui后在加入200ul的BCA(加入后的BCA不進行與樣品的混合,而是鋪在樣品的上面,用吹風機除去上方的氣泡)

         BCA的配置: BCA試劑A:BCA試劑B=50:1

⑤放置37°恒溫培養箱孵育30min

⑥讀板(吸光光度值為562)

10、對剩余的樣品按照體積5:1的比例加入Loading Buffer(6X)

11、將加好的樣品放入離心機順離,使離心管內壁的樣品甩下。

12、將樣品放入恒溫金屬浴鍋中100℃煮7min

13、將煮好的蛋白放入—20℃冰箱中備用(在離心管壁上標記好樣品名稱、日期)

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~

對比框

產品對比 產品對比 二維碼 意見反饋 在線交流
在線留言
主站蜘蛛池模板: 福贡县| 霞浦县| 玉山县| 社会| 藁城市| 保康县| 北流市| 通海县| 乌审旗| 仁化县| 武山县| 时尚| 平度市| 修文县| 乳源| 高邑县| 岚皋县| 玛曲县| 云南省| 永川市| 桐庐县| 木兰县| 吴忠市| 枣阳市| 广宁县| 富川| 景宁| 乌兰察布市| 陆川县| 元江| 平山县| 星座| 中卫市| 石首市| 盱眙县| 犍为县| 城步| 花莲市| 泰兴市| 万安县| 潜江市|