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免疫組化實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)的常見問題分析

閱讀:672      發(fā)布時間:2024-7-31
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1. IHC實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯色過深


一抗?jié)舛冗^高或孵育時間過長——降低一抗?jié)舛然驕p少孵育時間


孵育溫度過高——選擇4℃或室溫孵育


2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在非特異性顯色


石蠟切片脫蠟不干凈——延長脫蠟時間


蛋白封閉不充分——增加蛋白封閉時間


組織富含內(nèi)源性生物素與過氧化物酶——使用相關(guān)試劑進(jìn)行封閉


3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯色弱或無染色


一抗?jié)舛冗^低或孵育時間過短——增加一抗?jié)舛然蜓娱L孵育時間


組織中無目的抗原的表達(dá)


一抗種屬來源與二抗不匹配


注意事項(xiàng)


切片脫蠟和水化要充分,加反應(yīng)液時要覆蓋組織充分;每次加液前甩干洗滌液,同時防止干片。


一抗的沖洗原則:單獨(dú)沖洗,防交叉反應(yīng)污染;溫柔沖洗,防止切片脫落;推薦浸洗方式。


有條件的話最好立即拍照,若不能及時拍照,也要封好片和用指甲油封固,保持避光和濕度。


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