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HRP-SH,巰基修飾的辣根過氧化物酶的應用

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HRP-SH(巰基修飾的辣根過氧化物酶)是一種經過化學修飾的辣根過氧化物酶,其分子中引入了巰基(-SH),以下是對其詳細介紹:

一、合成制備

HRP-SH的合成主要通過化學修飾法實現。例如,可以使用2-亞氨基硫烷鹽酸鹽與辣根過氧化物酶在適當的緩沖液中反應,生成巰基修飾的HRP。此外,還有試劑盒法可用于HRP-SH的制備,如Abbkine的LliKine™辣根過氧化物酶(HRP)偶聯試劑盒,提供了一種簡單快速的方案,將HRP直接偶聯到含有自由氨基的蛋白質、多肽或其他配體上。

二、性質特點

  1. 催化活性:HRP-SH保留了辣根過氧化物酶的催化能力,能夠催化多種底物的氧化反應,如在過氧化氫存在下,催化底物產生顏色變化或化學發光信號。

  2. 反應性基團:巰基作為反應性基團,能夠與其他含有活性基團的分子發生反應,形成穩定的共價結合。例如,巰基可以與馬來酰亞胺基團反應,用于標記抗體、蛋白質或其他生物分子,實現信號放大和檢測。

  3. 高特異性:HRP-SH在與其他分子結合時具有較高的特異性,能夠實現對目標物質的高靈敏度和特異性檢測。

  4. 穩定性:經過巰基修飾的辣根過氧化物酶在儲存和使用過程中表現出良好的穩定性,有利于其在各種實驗和應用中的長期保持活性。

三、應用領域

  1. 免疫檢測:在酶聯免疫吸附測定(ELISA)、免疫印跡(Western blot)、免疫組化等實驗中,HRP-SH可作為標記酶,與抗體結合,用于檢測抗原或抗體的存在和含量。

  2. 生物傳感器:HRP-SH可用于構建生物傳感器,通過與目標生物分子結合,產生可檢測的信號變化,用于檢測生物分子、藥物和環境污染物等。

  3. 化學合成:巰基可以參與多種化學反應,如縮合反應和還原反應,為藥物合成和材料科學提供多種合成路徑。

  4. 生物標記:由于其良好的特異性和穩定性,HRP-SH還可以用于生物標記,實現對細胞、組織或生物體的特異性標記和追蹤。

  5. 藥物傳遞:通過與其他藥物分子結合,HRP-SH可以用于構建藥物傳遞系統,實現藥物的定向傳遞和釋放。

四、注意事項

  1. 保存條件:HRP-SH應在冷藏條件下(-20℃)保存,以保持其活性和穩定性。

  2. 使用前處理:使用前需根據具體實驗要求進行適當的處理,如溶解、稀釋等,并注意避免反復凍融。

  3. 科研用途:HRP-SH僅供科研使用,不能用于人體實驗或臨床診斷。

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