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Biotin-Insulin,生物素標記胰島素的概述

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Biotin-Insulin(生物素標記胰島素)是一種通過生物素(Biotin)標記的胰島素復合物,具有高度特異性、強信號放大能力、多功能應用和穩定性,在生物醫學研究和藥物開發中具有重要應用價值。以下是對其的詳細介紹:

合成方法

  1. 溶解胰島素與標記試劑:將胰島素溶解在PBS緩沖液中,配制成2-4mg/mL的溶液;把生物素標記試劑溶解在二甲基亞砜中,再加入適量緩沖液使其充分溶解并活化。

  2. 標記反應:將活化后的生物素標記試劑緩慢滴加到胰島素溶液中,在合適的溫度下攪拌反應1-4小時。

  3. 純化:反應結束后,使用透析袋或超濾裝置對標記后的胰島素進行純化,去除未反應的生物素標記試劑和其他雜質。

  4. 檢測與驗證:采用紫外-可見光譜、熒光光譜、質譜等方法進行檢測和驗證,以確保標記成功且產物符合要求。

應用領域

  1. 免疫分析:在酶聯免疫吸附試驗(ELISA)等免疫檢測方法中,使用Biotin-Insulin來檢測和量化胰島素。

  2. 生物化學研究:用于研究胰島素與其受體的相互作用,以及其在細胞和組織中的作用。

  3. 藥物開發:用于開發和優化胰島素相關藥物,并評估其效果和穩定性。

  4. 細胞成像:Biotin-Insulin可以通過親和素介導的連接,固定在各種基質上,如微孔板、磁珠或玻片,在細胞成像等實驗中具有廣泛應用。

  5. 定量檢測:通過生物素標記,胰島素可以與帶有熒光、酶或金屬標記的親和素復合物結合,實現高靈敏度的定量檢測。

  6. 研究胰島素受體:Biotin-Insulin還可用于研究胰島素受體與胰島素的結合機制,特別是在細胞表面或組織切片上,通過使用熒光或其他標記的親和素進行檢測。

優勢

  1. 高靈敏度和高特異性:生物素能與親和素或鏈霉親和素結合,形成極其穩定的四聯體復合物,這種特性使生物素標記的胰島素在各種生物實驗中具有高靈敏度和高特異性。

  2. 多功能性:Biotin-Insulin可以通過親和素介導的連接,固定在各種基質上,如微孔板、磁珠或玻片,這使得它在ELISA、Western blot、免疫沉淀和細胞成像等實驗中具有廣泛應用。

  3. 穩定性:生物素標記胰島素具有較好的穩定性,能夠在各種實驗條件下保持其活性。

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