以下是關于 生物素標記依帕司他（Biotin - Epalrestat） 的詳細介紹，內容涵蓋基本信息、制備方法、特性優勢及應用領域等方面：
生物素（Biotin）：
又稱維生素 H 或輔酶 R，是一種小分子水溶性維生素，其分子結構中的咪唑酮環可與親和素（Avidin）或鏈霉親和素（Streptavidin）以 ** 高親和力（Kd≈10?1? M）** 特異性結合，常用于生物分子的標記與檢測。
依帕司他（Epalrestat）：
是一種醛糖還原酶抑制劑（ARI），化學名為 N - (1,3 - 二噻烷 - 2 - 基甲基) - 5 - 甲基 - 2 - 苯基呋喃 - 3 - 甲酰胺，分子式為 C15H15NO2S2，分子量為 303.42。
生物素標記依帕司他：
通過化學偶聯技術將生物素分子連接到依帕司他的特定官能團（如氨基、巰基等）上，形成具有靶向識別能力的標記化合物。
選擇合適的生物素活化試劑，例如：
生物素 - N - 羥基琥珀酰亞胺酯（Biotin - NHS）：適用于與依帕司他分子中的氨基（?NH2）反應。
生物素 - 馬來酰亞胺（Biotin - Maleimide）：適用于與巰基（?SH）反應（若依帕司他結構中含巰基或經修飾引入巰基）。
活化條件：將生物素衍生物溶于有機溶劑（如 DMSO、DMF），加入堿（如 DIPEA）調節 pH 至弱堿性（pH 7.5 - 9.0），促進活化反應。
將活化后的生物素衍生物與依帕司他在室溫或溫和加熱條件下混合，通過官能團的共價結合形成穩定產物。例如：
生物素與親和素 / 鏈霉親和素的結合具有強穩定性，可通過熒光標記、酶標記（如 HRP）或同位素標記的親和素實現信號放大，適用于微量樣品的檢測（如 ELISA、免疫熒光等）。
合理設計標記位點（如選擇非活性位點連接生物素）可避免影響依帕司他的醛糖還原酶抑制功能，使其在標記后仍能參與生物靶點的相互作用，適用于藥代動力學研究（如體內分布、代謝途徑追蹤）。
生物素 - 親和素系統（BAS）已廣泛應用于生物技術領域，配套試劑（如親和素磁珠、親和素包被板）成熟，便于實驗流程標準化。
依帕司他的醛糖還原酶抑制活性可通過生物素標記技術進行高通量篩選。例如，將生物素標記的底物（如葡萄糖）與酶共孵育，通過親和素捕獲反應產物，定量評估依帕司他對酶活性的抑制程度。
標記位點選擇：需避免生物素連接至依帕司他的活性中心（如與醛糖還原酶結合的關鍵基團），可通過分子對接模擬預測最佳標記位置。
溶劑兼容性：依帕司他水溶性較差，反應體系中需加入適量有機溶劑（如 DMSO）助溶，但需控制濃度以避免蛋白變性或細胞毒性。
穩定性驗證：標記物需在生理條件（pH 7.4、37℃）下驗證穩定性，避免生物素 - 連接鍵過早斷裂導致信號丟失。
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