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重組慢病毒的基本操作規范介紹
閱讀：442 發布時間：2023-11-8
慢病毒是一種有包膜的RNA病毒，直徑為80-120nm，呈二十面體對稱結構、球形。病毒顆粒最外層是包膜(包膜蛋白決定了感染細胞的類型)，再往里依次為基質蛋白和衣殼，里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉錄酶、整合酶和蛋白酶)。
慢病毒（Lentivirus）是逆轉錄病毒的一種，基因組為雙鏈RNA。但區別于一般的逆轉錄病毒，慢病毒具有更廣的宿主范圍，對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。
重組慢病毒載體是以HIV-1（人類免疫缺陷I 型病毒）為基礎發展起來的工具載體，其毒性基因已經被剔除并被外源目的基因所取代，屬于假型病毒（一次性感染能力而無復制產生新病毒能力）。將靶基因隨機整合到宿主的基因組中，并且能夠在細胞系中穩定表達若干代，可以進行穩轉細胞株的篩選。被廣泛應用于各種細胞系基因敲除、基因過表達、RNA干擾。
在轉染遺傳物質到細胞基因組中的工作中，重組慢病毒載體是一個強大和有效的工具，基本操作規范如下：
1. 在實驗室工作時，任何時候都必須穿著連體衣、隔離服或工作服；應戴上合適的手套和口罩。
2. 病毒操作時最好使用生物安全柜。如果使用普通的超凈工作臺操作病毒，請不要打開風機。
3. 所有的技術操作要按盡量減少氣溶膠和微小液滴形成的方式來進行。如果出現病毒污染，請立即用70%的酒精加1%SDS溶液擦拭干凈。
4. 如需離心，應使用密封性好的離心管，可用 Parafilm 膜封口后離心，而且最好使用組織或細胞培養室內的離心機。
5. 用顯微鏡觀察細胞感染情況時用遵從以下步驟：擰緊培養瓶或蓋緊培養板，并在使用70%乙醇清理所有受到污染的材料、標本和培養物在廢棄或清潔再利用之前，必須清除污染。廢棄的含病毒的培養基加入84消毒液（1:20左右），浸泡一天后丟棄。接觸過病毒的槍頭，離心管，培養板等其他物品可用84消毒液稀釋液處理，也可以用煮沸處理半小時或高壓濕熱滅菌（121℃，30min）。
6. 手套用完后，應先消毒再摘除，隨后必須洗手。