2× 高保真 PCR 預混液
MCE 國際站：2× High-Fidelity PCR Master Mix
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件： -20℃ 2 年； 4℃ 3 個月避免反復凍融
簡介：2× High-Fidelity PCR Master Mix 是一款新型高保真高效率的即用型 PCR 擴增預混液，適用于高難度長片段的 PCR 擴增實驗。
概述：MCE 2× High-Fidelity PCR Master Mix 是一款新型高保真 PCR 擴增預混液。本品包含改造的新型快速高保真 DNA 聚合酶，該酶具有 5’→3’DNA 聚合酶活性和 3’→5’ 核酸外切酶活性。額外添加的熱啟動因子，可有效控制低溫情況下的非特異擴增和酶活損耗，保證了 PCR 擴增的特異性和穩定性；特異性延伸因子則使其在延伸能力和擴增速度方面得到大幅提升，可有效擴增長達 10 kb 的目的片段，擴增速度可達 15 sec/kb。本產品為即用型預混液，反應時只需加入模板和引物即可快速高效完成PCR 反應，減少操作過程中的污染幾率。產品中不含溴酚藍染料，PCR 反應后需要加入 DNA loading buffer 方可進行電泳檢測。PCR 產物為平末端。
描述：
MCE 2× High-Fidelity PCR Master Mix 是一款新型高保真 PCR 擴增預混液。產品含有新型改良的高保真 DNA 聚合酶，具有更高的 5'→3' 聚合酶活性和更高的 3'→5' 外切酶活性。附加的熱啟動因子可激活，通過最大限度地減少非特異性擴增和酶活性損失來提高 PCR 擴增的特異性和穩定性。產品還含有延伸增強因子，使延伸速度和擴增效率顯著提高。它可以有效擴增長達 10 kb 的片段，擴增速度可達 15 秒/kb。
MCE 2× High-Fidelity PCR Master Mix 是一種即用型預混液。添加引物和模板后，優化的系統將提供靈敏可靠的 DNA 合成。它節省了制備時間，降低了多個移液步驟造成污染的風險，并提供一致的反應性能。本產品不含DNA上樣緩沖液，在瓊脂糖凝膠上電泳時，需將DNA上樣緩沖液加入PCR產物中。PCR產物為平端。
操作說明：1. 配置反應體系建議的模板量：基因組 DNA，50-200 ng；質粒 DNA，10 pg-20 ng；cDNA，1-5 μL (不超過 PCR 反應總體積的 1/10)。配制 PCR 反應液 (反應液配制請在冰上進行)注： a. 引物終濃度為 0.5 μM 可以得到較好的結果，反應性能較差時，可以在 0.2~1.0 μM 范圍內調整引物濃度。b. 1× 預混液中包含 1.5 mM Mg2+ 和 1 U/50 μL 的聚合酶。2. PCR 儀程序設置a. 建議采用兩步法 PCR 反應程序，如果該程序得不到良好的實驗結果時，再進行 PCR 條件的優化。b. 由于使用 Tm 值較低的引物等原因，兩步法 PCR 反應擴增性能較差時，可以嘗試進行三步法 PCR 擴增反應。c. 本產品中添加特異性延伸因子，使酶在延伸能力和擴增速度方面得到大幅提升。注： a. 預變性程序設置：溫度推薦 98℃，時間為 3 min；若模板 GC 含量較高，預變性時間可延長 2-7 min。b. 退火程序設置：溫度推薦 60℃，時間為 20 sec；也可以建立一個溫度梯度尋找引物與模板結合的最適溫度。c. 延伸程序設置：溫度推薦 72℃，時間為 30 sec/kb；若模板比較復雜，可延長至 60 sec/kb。d. 擴增產物：請將 PCR 擴增產物放置于 -20℃ 保存，防止該酶降解擴增產物。擴增產物為平末端。
注意事項：a. 使用前，請上下輕輕顛倒混勻，避免產生氣泡，防止因混合不均勻造成的反應效果不佳。b. 反應液的配制，請在冰上操作完成。c. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。d. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作
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