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雙分子熒光互補(Bimolecular Fluorescence Complementation, BiFC)分析是一種用于研究dànbáizhì-dànbáizhì相互作用的強大技術。該方法基于熒光蛋白的片段化和復性原理,通過將熒光蛋白(如黃綠色熒光蛋白 YFP 或增強型綠色熒光蛋白 EGFP)分裂成兩個非熒光片段,并分別與待研究的兩個蛋白融合表達。當兩種蛋白在細胞內或體外發生相互作用時,熒光蛋白片段在空間上靠近并復性,恢復熒光信號,從而實現對蛋白互作的可視化檢測。BiFC 分析的主要作用在于提供一種簡便、高效的蛋白互作檢測手段,特別適用于活細胞環境下的研究。與傳統的酵母雙雜交和免疫共沉淀方法相比,雙分子熒光互補(Bimolecular Fluorescence Complementation, BiFC)分析具有更高的空間分辨率和時空特異性。它無需外源性化學試劑,能夠直接在細胞內檢測蛋白互作,并結合熒光顯微鏡或流式細胞儀進行定量分析。例如,在信號轉導研究中,BiFC 可用于檢測受體蛋白與下游效應分子之間的動態互作;在細胞周期調控領域,BiFC 也被用于揭示關鍵細胞周期蛋白的時空互作特征。此外,BiFC 技術廣泛應用于癌癥生物學、神經科學、植物生物學等多個領域,為解析復雜的細胞信號通路和病理機制提供了直觀的實驗手段。
雙分子熒光互補(Bimolecular Fluorescence Complementation, BiFC)分析的優勢在于其高靈敏度和特異性。由于熒光蛋白復性后形成的熒光信號較為穩定,不依賴于持續的蛋白相互作用,因此 BiFC 能夠檢測短暫或弱親和力的蛋白互作,這在許多情況下比共沉淀等方法更具優勢。此外,BiFC 可以在單細胞水平上檢測蛋白互作,使其成為研究細胞間異質性和亞細胞器蛋白互作的理想工具。例如,研究人員可利用 BiFC 在不同細胞器(如細胞核、線粒體、內質網)內標記蛋白互作,揭示其亞細胞定位及動態變化。
然而,雙分子熒光互補(Bimolecular Fluorescence Complementation, BiFC)分析也存在一定局限性。例如,熒光蛋白的復性是不可逆的,因此無法實時監測蛋白互作的解離。此外,熒光蛋白復性可能會影響dànbáizhì的正常功能或穩定性,導致實驗結果存在一定的背景信號或假陽性。因此,在實驗設計時,通常需要進行適當的陰性對照實驗,例如使用點突變或無互作蛋白,以排除非特異性復性對結果的干擾。BiFC 需要在熒光顯微鏡或流式細胞儀下進行信號檢測,對實驗設備和數據分析提出了一定的要求。
近年來,隨著熒光蛋白工程的不斷發展,雙分子熒光互補(Bimolecular Fluorescence Complementation, BiFC)分析技術也在不斷優化。例如,新型熒光蛋白(如 split mNeonGreen 和 split Venus)被引入 BiFC 體系,提高了信號強度和動態范圍。雙顏色 BiFC(Dual-color BiFC, dcBiFC)和三顏色 BiFC(TriFC)等多重熒光互補技術的出現,使得研究人員可以同時檢測多個蛋白復合物,為多分子相互作用研究提供了更豐富的信息。這些技術進步使 BiFC 在蛋白相互作用研究中的應用更加廣泛,并不斷推動細胞生物學、疾病研究和藥物篩選領域的發展。
百泰派克生物科技憑借zhuānyè的蛋白zhìzǔxué研究平臺,為客戶提供高質量的蛋白分析服務。無論是研究蛋白互作網絡,還是探索特定信號通路,我們都能提供高效、jīngzhǔn的解決方案,助力科研人員獲得高質量的實驗數據。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優勢:
1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量蛋白zhìzǔxué、bǎxiàngdàn白zhìzǔxué、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白zhìzǔxué分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白zhìzǔxué服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析,發現新的生物標記物;
2.體內體外多種dànbáizhì標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統準確。
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優勢:
1.技術優良,*技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。
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