如何通過Edman降解實現高效蛋白質序列分析？實驗室指南檢測技術服務詳情介紹

Edman降解是一種經典且高度特異的dànbáizhìN端序列分析技術，至今仍在結構dànbáizhì組學、抗體工程與生物藥研發中扮演著重要角色。盡管高分辨率質譜技術日新月異，Edman降解因其對N端氨基酸的逐步解析能力，在某些特定應用場景中仍具有bùkětìdài的價值。本文將從實驗原理、操作流程、樣本準備、結果解析及常見問題出發，系統解析如何高效開展Edman降解實驗，助力科研人員獲得可靠的dànbáizhì序列信息。

一、什么是Edman降解？

Edman降解由Pehr Edman于1950年提出，是一種通過周期性化學反應從多肽N端逐個釋放氨基酸殘基并進行鑒定的技術。它的核心在于利用酚異硫氰酸酯（PITC）與N端氨基酸反應，形成可被裂解和分析的衍生物，從而實現序列的“逐步拆解"。與質譜分析不同，Edman降解不依賴質量電荷比（m/z），而是基于化學選擇性，因而在已知目標蛋白并需要驗證N端完整性、識別修飾或突變時尤為有效。

二、Edman降解的適用場景

雖然現代dànbáizhì組學多依賴質譜，但Edman降解仍在以下情境中發揮著dútè優勢：

• 重組蛋白或單克隆抗體的N端驗證

• 蛋白修飾或截斷的鑒定

• 用于驗證質譜推測結果的準確性

• 無法離子化或質譜響應弱的樣本

在百泰派克生物科技的實際項目中，我們常結合Edman降解與質譜分析交叉驗證dànbáizhì序列，提升結果的可靠性。

三、Edman降解的基本流程

1、樣本固定（Immobilization）

Edman降解通常要求樣品被固定在聚偏二氟乙烯（PVDF）膜或玻璃纖維片上，防止反應中蛋白丟失。通常通過SDS-PAGE轉膜完成，需避免使用干擾化學物質如Tween-20。

2、N端氨基酸衍生化

使用酚異硫氰酸酯（PITC）與N端氨基反應，形成環狀PTH氨基酸衍生物。該反應在堿性條件下進行，對水敏感，因此對環境控制較為嚴格。

3、裂解與回收

加入無水酸使肽鏈裂解，釋放PTH氨基酸。該步驟需高效回收PTH產物以確保后續分析的靈敏度。

4、分析與鑒定

利用高效液相色譜（HPLC）或毛細管電泳分析PTH衍生物，通過保留時間匹配標準氨基酸來確認N端序列。

四、實驗成功的關鍵因素

為了獲得高質量的序列數據，以下幾點尤為關鍵：

1、樣本純度

Edman降解對樣本純度要求jígāo。混雜蛋白會導致多重信號干擾，影響序列判斷。

2、N端可接近性

如果N端被封閉（如乙?；?、修飾或信號肽未切除），將無法進行Edman降解。預處理酶切或化學去修飾可能是必要步驟。

3、轉膜完整性

蛋白在電泳后轉膜過程中若發生降解或遷移失敗，亦會影響反應效率。

4、每循環反應效率

隨著反應周期增加，降解效率會逐步下降。通常建議讀取qián10–20個氨基酸。

五、Edman降解 vs 質譜：如何選擇？

建議策略： 若關注N端序列完整性或修飾，Edman降解是優選方法；若需獲取整體序列或高通量分析，質譜更具優勢。在百泰派克生物科技，我們提供Edman降解與高分辨質譜相結合的綜合dànbáizhì測序方案，為客戶定制zuì合適的策略。

在百泰派克，我們擁有：

• 自動化Edman降解儀

• 標準化PVDF轉膜流程與樣本前處理體系

• 與高分辨質譜聯合驗證方案

• 支持科研項目申報的完整技術資料與報告交付

無論您是進行單抗質量驗證、N端修飾檢測，還是為藥物申報準備質量研究數據，我們都可提供高靈敏、高可靠的dànbáizhì序列分析服務。

盡管Edman降解是一項“老牌技術"，但其在dànbáizhìN端序列解析領域仍具有dútè價值。尤其在結構驗證、生物制藥質控和蛋白工程中，準確的N端信息往往是不可忽視的關鍵。如果您正在尋找高效、jīngzhǔn、可驗證的dànbáizhì序列分析服務，歡迎聯系百泰派克生物科技。我們不僅提供技術，更提供zhídexìnlài的數據支持與科研合作伙伴關系。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優勢：

1.采用目前世界上先進的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優勢：

1.技術先進，填補技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務；

3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!

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