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完整dànbáizhì分析質譜(Top-Down Proteomics)是指通過質譜技術直接分析完整dànbáizhì的分子量、結構和翻譯后修飾(PTMs),而無需對dànbáizhì進行酶切或降解的研究方法。相較于傳統的底物蛋白zhìzǔxué方法,完整dànbáizhì分析質譜在保持dànbáizhì原始狀態的同時,可以提供更全面的結構信息,特別是對dànbáizhì異構體及復雜修飾的研究具有重要意義。
一、原理
完整dànbáizhì分析質譜以質譜為核心,通過直接離子化和檢測完整dànbáizhì分子,結合高分辨率和高精度的質譜儀,對dànbáizhì的質量和結構特征進行分析。此方法的關鍵技術包括:
1.電噴霧電離質譜(ESI-MS):
適合液相樣品,通過軟離子化方式保持dànbáizhì的原始結構和修飾。
2.基質輔助激光解吸電離質譜(MALDI-MS):
適合高通量分析,能夠快速獲得dànbáizhì的分子量信息。
3.高分辨率質譜儀:
如Orbitrap和FTICR-MS,可以jīngquè解析dànbáizhì的質量及其修飾信息。
完整dànbáizhì分析通常通過串聯質譜(MS/MS)結合碎裂技術(如碰撞誘導解離CID或電子轉移解離ETD)對dànbáizhì的一級結構及修飾位置進行深入解析。
二、優勢
1.保持dànbáizhì的原始狀態:
與酶切蛋白zhìzǔxué不同,完整dànbáizhì分析質譜直接測定dànbáizhì的整體分子量,避免了酶切過程可能導致的信息丟失。
2.揭示dànbáizhì異構體:
完整dànbáizhì分析可以區分同一dànbáizhì的不同異構體,為研究dànbáizhì功能及疾病相關的異構體提供關鍵數據。
3.全面檢測翻譯后修飾:
能夠同時檢測和定位多種翻譯后修飾,如磷酸化、糖基化和乙酰化。
4.高通量性與靈敏度:
現代質譜技術允許快速、高精度地分析復雜的dànbáizhì樣品,尤其適用于臨床生物標志物的篩選和驗證。
三、應用
完整dànbáizhì分析質譜因其dútè的技術特點,在基礎研究和應用領域中廣泛使用,包括:
dànbáizhì翻譯后修飾研究:如磷酸化修飾在信號轉導中的作用,糖基化修飾在癌癥中的標志作用。
dànbáizhì異構體表征:如單克隆抗體的異構體分析,用于優化藥物開發。
疾病標志物發現:通過完整dànbáizhì分析,jīngzhǔn發現疾病相關的dànbáizhì,特別是在癌癥和神經退行性疾病領域。
dànbáizhì復合物的研究:解析dànbáizhì復合物的組分和相互作用,為分子機制研究提供支持。
四、挑戰與解決方案
完整dànbáizhì分析質譜技術也面臨一些挑戰,包括:
1.dànbáizhì離子化效率低:
完整dànbáizhì通常較大,離子化難度較高,可能影響質譜檢測的靈敏度。
2.復雜樣品分離難度大:
生物樣品中dànbáizhì的復雜性對分離純化技術提出了更高的要求。
3.數據解析復雜:
完整dànbáizhì數據量大且包含異構體、修飾等復雜信息,數據分析耗時較長。
為克服這些問題,研究者通常結合多種前處理技術(如高效液相色譜分離)和高性能質譜儀,顯著提升數據質量和解析效率。此外,先進的生物信息學工具也為dànbáizhì數據解析提供了強有力的支持。
百泰派克生物科技以全球lǐngxiān的質譜平臺(包括Orbitrap Fusion Lumos和Q Exactive HF)和zhuānyè的技術團隊,提供高精度的完整dànbáizhì分析質譜服務。我們不僅支持dànbáizhì分子量測定,還可對翻譯后修飾和dànbáizhì異構體進行深入解析。通過優化樣品制備和數據處理流程,我們確保為客戶提供可靠、準確的研究數據。無論您關注的是基礎科學研究還是藥物開發,百泰派克都將成為您的理想合作伙伴,為您的研究保駕護航。
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百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量蛋白zhìzǔxué、bǎxiàngdàn白zhìzǔxué、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白zhìzǔxué分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白zhìzǔxué服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
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百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優勢:
1.技術先進,填補技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。
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3.業務范圍覆蓋蛋白zhìzǔxué、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
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