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多肽測序技術多肽測序技術通過確定dànbáizhì氨基酸序列及翻譯后修飾,科研人員能夠深入解析生命過程,發現新的疾病標志物,推進藥物靶點開發。PMF vs MS/MS的多肽測序技術原理與應用解析將助力科研人員在復雜樣品和jīngzhǔn研究中選擇zuì合適的策略。目前,隨著質譜技術的發展,肽段分析的分辨率、靈敏度和通量不斷提升,肽指紋圖譜(Peptide Mass Fingerprinting, PMF)和串聯質譜(Tandem MS, MS/MS)是當前zuì常用的多肽測序策略,科研人員應根據實驗目標、樣品特性和研究需求選擇合適策略,或采用多技術整合,實現更高分辨率、更高通量的蛋白zhìzǔxué研究。
一、PMF與MS/MS技術原理概述
1、 Peptide Mass Fingerprinting(PMF):基于肽段質量的模式識別
PMF是質譜多肽鑒定的經典方法,主要依賴于dànbáizhì酶解后所得多肽的分子質量指紋。具體流程包括:
(1) 酶解:將目標蛋白用yídànbáiméi等特異性酶切割,生成多肽混合物
(2)質譜分析:采用MALDI-TOF(基質輔助激光解吸/電離-飛行時間)測定多肽分子質量(m/z)
(3)數據庫比對:將實驗中獲得的質量指紋與理論數據庫中的酶解肽質量進行匹配,確定蛋白種類。
優點:操作簡便、通量高、成本低,適用于單蛋白樣品的快速鑒定。
局限:無法提供序列信息,低豐度蛋白和復雜樣本中的多肽鑒定能力有限;翻譯后修飾(PTMs)無法直接識別。
2、Tandem Mass Spectrometry(MS/MS):基于肽段碎片離子的序列解析
MS/MS采用串聯質譜進行多肽測序。其核心流程包括:
(1)酶解與分離:同樣*行酶切,通常采用LC(液相色譜)分離肽段
(2)質譜檢測:在ESI(電噴霧電離)或MALDI源中,質譜儀測定母離子(前體肽段)的m/z
(3)選擇母離子并解離:選定特定母離子后,在碰撞室中誘導其裂解,產生b、y等系列離子。
(4)檢測碎片離子:分析碎片離子的質量與豐度,推導氨基酸序列,進行數據庫搜索或de novo測序。
優點:分辨率高、序列信息完整,可識別復雜混合物中低豐度蛋白,能夠定位修飾位點。
局限:對儀器要求高,操作復雜,數據分析耗時長。
二、技術對比分析:PMF vs MS/MS
從技術本質來看,PMF適合于快速篩選和單蛋白樣品,而MS/MS則適合復雜樣品解析、修飾鑒定及新蛋白測序。科研人員可根據樣品類型、研究目的和設備條件,選擇合適策略。
三、應用場景與技術進展
1、 PMF的典型應用
(1)蛋白純化后的快速鑒定:純化蛋白(如SDS-PAGE膠條回收)經yídànbáiméi酶解后,利用MALDI-TOF-PMF匹配數據庫,快速確認蛋白種類。
(2) dànbáizhì質量控制與批次驗證:在生物制藥中,常用于批次一致性檢測,保證產品質量。
(3) 成本控制與高通量篩選:PMF因通量高、速度快,適合用于大量樣品初篩。
2、MS/MS的典型應用
(1)蛋白zhìzǔxué研究:結合LC-MS/MS,可在復雜生物樣品(如血漿、組織)中,定性定量分析上千種蛋白;
(2)翻譯后修飾解析:定位磷酸化、糖基化、乙酰化、泛素化等關鍵修飾位點,揭示功能調控機制;
(3)新抗原和生物標志物發現:肽測序在腫瘤miǎnyìzhìliáo、新藥研發中用于發現新抗原或疾病相關肽段;
(4)de novo測序與物種特異蛋白解析:無需數據庫,直接解析未知蛋白序列。
四、未來趨勢與技術融合
隨著質譜技術的進步,PMF與MS/MS正在逐漸融合與互補:
1、高分辨MALDI-TOF/TOF:MALDI技術不僅可用于PMF,還能實現MS/MS碎片檢測,提升信息量;
2、LC-MALDI-MS/MS混合策略:將LC分離與MALDI檢測結合,兼顧分離效率與分析速度;
3、AI輔助多肽序列解析:引入深度學習模型,提高碎片圖譜解析精度,解決同分異構體與復雜修飾肽段識別問題;
4、單細胞質譜技術:推動單細胞水平的肽測序,為jīngzhǔn醫學提供更多維度的數據支持。
在肽測序領域,百泰派克生物科技依托*質譜平臺(包括Orbitrap Fusion Lumos、Q-Exactive HF-X、MALDI-TOF/TOF),結合自主開發的樣品前處理和數據分析流程,提供從PMF到MS/MS的全流程多肽測序解決方案。為您快速PMF鑒定;高分辨MS/MS測序;多技術整合;全鏈路定制服務,以*的儀器平臺、完善的解決方案和zhuānyè的技術團隊,為全球客戶提供jīngzhǔn、可靠的肽測序服務,共同推動蛋白組學與生物醫藥領域的創新發展。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優勢:
1.采用目前世界上*的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量蛋白zhìzǔxué、bǎxiàngdàn白zhìzǔxué、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白zhìzǔxué分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白zhìzǔxué服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析,發現新的生物標記物;
2.體內體外多種dànbáizhì標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統準確。
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優勢:
1.技術*,*技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。
1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務;
3.業務范圍覆蓋蛋白zhìzǔxué、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
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