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在dànbáizhì組學研究中,質譜技術已成為解析生命系統復雜性的重要工具。特別是Shotgun Proteomics(發現型dànbáizhì組學)與Targeted Proteomics(bǎxiàngdàn白zhìzǔxué)兩種主流策略,其技術原理、應用場景和數據特性各異,直接影響實驗設計與結果解讀。本文將系統比較這兩類方法,幫助科研人員在不同研究階段作出合理選擇。
一、Shotgun Proteomics:系統性探索的優選策略
Shotgun Proteomics是一種自下而上的全譜掃描方法。實驗流程包括dànbáizhì酶解、肽段分離(LC)、質譜采集(MS/MS)與數據庫搜索鑒定。該策略可在單次實驗中檢測成百上千種蛋白,適用于未知機制探索、生物標志物篩選和復雜樣本比較等場景。
※ 其主要特點包括:
通量高:可覆蓋大多數可檢測蛋白;
依賴數據庫:鑒定效率與數據庫質量密切相關;
相對定量:常用Label-free或TMT/iTRAQ等方法進行相對表達量分析;
數據復雜:對質譜平臺和生信分析要求較高。
盡管靈敏度和重現性不及靶向方法,但在發現階段具備bùkětìdài的廣譜性與信息量優勢。
二、Targeted Proteomics:驗證與定量的jīngquè利器
Targeted Proteomics是一種聚焦特定蛋白/肽段的jīngzhǔn定量策略,常見模式包括SRM/MRM、PRM等。研究者在實驗前確定目標肽段,通過定向監測實現高靈敏度、高特異性的檢測,特別適合候選靶點驗證、臨床樣本定量及方法開發等需求。
※ 其核心優勢:
定量準確:與內標聯合使用時可實現juéduì定量;
重現性強:跨批次實驗間一致性高;
檢測限低:適合低豐度蛋白的jīngzhǔn測定;
流程標準化:利于方法在不同平臺間遷移。
Targeted方法對前期方法開發依賴較大,需明確目標蛋白序列、肽段特征及離子轉itions,但一旦建立,可廣泛應用于高通量臨床轉化研究。
三、核心技術對比
四、策略選擇:依據研究目的與資源條件
※ 初步探索與機制構建:優先選擇Shotgun
當研究目標尚不明確,需在組織、細胞或體液等樣本中全局篩查差異蛋白或構建調控網絡時,Shotgun Proteomics能提供zuì大信息覆蓋。其不依賴先驗知識的特性,使其成為新型生物標志物發現和機制假設生成的shǒuxuǎn技術。
※ 靶點驗證與定量研究:推薦使用Targeted
若已明確候選蛋白,需在多組樣本中jīngquè定量其表達水平,或評估其生物學穩定性與診斷潛力,Targeted Proteomics更具優勢。特別在生物醫學轉化研究中,靶向方法提供的高一致性和juéduì定量能力可滿足臨床驗證的嚴格需求。
※ 綜合使用:探索與驗證的有效結合
在系統生物學研究中,常采用Shotgun初篩+Targeted驗證的聯合策略。前者完成差異蛋白鑒定與通路分析,后者針對重點靶點開展定量驗證,實現從發現到驗證的閉環證據鏈。
五、實踐建議:從需求出發優化設計
樣本類型復雜且目標不明:優先采用Shotgun進行全譜分析;
研究周期有限但靶點明確:可跳過全譜直接開展靶向定量;
資源允許且研究深入:建議整合兩種策略,提升研究深度與可靠性。
Shotgun與Targeted Proteomics各有優勢,適用于不同研究階段與科研目標。理解兩者原理及應用差異,是jīngzhǔn開展dànbáizhì組學研究的前提。在實驗設計中合理整合這兩種策略,能顯著提升數據解釋力與研究影響力。在dànbáizhì組學服務中,百泰派克生物科技提供包括DIA、TMT、PRM在內的多種技術平臺,結合自動化樣本前處理與高分辨率質譜設備,實現從“廣泛發現"到“jīngzhǔn驗證"的一體化服務流程。我們通過標準化流程與定制化分析,協助客戶在基礎研究與臨床轉化間高效橋接。如需獲取個性化方案建議或合作咨詢,歡迎聯系我們。
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※服務優勢:
1.采用目前世界上*的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
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百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學、bǎxiàngdàn白zhìzǔxué、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
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※服務優勢:
1.技術*,*技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
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