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在蛋白組學研究中,選擇合適的質譜采集方式是獲得高質量數據的關鍵。目前,SWATH-MS(Sequential Window Acquisition of all Theoretical fragment ion spectra)與DDA-MS(Data-Dependent Acquisition)是兩種主流的數據采集技術,各具優勢。對于科研人員而言,理解這兩種方法的原理、適用場景和技術局限,將有助于制定更合理的實驗策略。
一、什么是DDA-MS?
DDA(Data-Dependent Acquisition)是目前應用zuì廣泛的質譜采集策略之一。其工作原理是:質譜儀在一次MS1掃描后,根據預設的強度閾值,選擇zuì強的若干前體離子進行MS/MS碎裂分析。
? 優勢:
高質量MS/MS譜圖:針對高豐度離子,能夠獲得高分辨率、高信噪比的碎片譜。
成熟的數據庫搜索工具:如Mascot、SEQUEST、MaxQuant等支持廣泛。
適合新蛋白鑒定:尤其在探索性研究中表現優異。
?? 局限:
采集偏倚:易忽略低豐度蛋白或復雜樣本中的次要離子。
重復性差:由于每次采集選擇的前體離子不同,生物重復間可比性較差。
數據缺失嚴重:導致蛋白定量不完整,影響下游分析的穩健性。
二、什么是SWATH-MS?
SWATH-MS是基于DIA(Data-Independent Acquisition)策略的一種數據采集方法,它將m/z范圍劃分為連續的窗口(通常為20–25 Da),對每個窗口內所有離子同時進行碎裂和記錄。
? 優勢:
高度重現性:全掃描方式使每次運行的數據一致,利于跨組學比較。
全面覆蓋低豐度蛋白:不受離子強度選擇限制,提高檢出率。
適合大規模定量研究:如生物標志物篩選、多批次樣本分析。
?? 局限:
譜圖重疊嚴重:碎片離子來源復雜,解析難度高。
對光譜庫依賴強:需要高質量、完整的參考光譜庫支持分析。
前期方法建立復雜:涉及窗口設置、標準品選擇等多個步驟。
三、樣本類型與研究目標:你該如何選擇?
1、探索性 vs 驗證性研究
若目標是發現新的蛋白或通路,建議優先選擇DDA-MS,其對新蛋白具有更強的鑒定能力。
若是針對已知蛋白進行大規模、重復性強的定量分析,如候選生物標志物驗證,則SWATH-MS更具優勢。
2、 樣本復雜度
對于復雜度較低的樣本(如純化蛋白、細胞系),DDA足以應對;
而對于組織樣本、體液、微量起始材料,SWATH能提供更全面的定量覆蓋。
3、預算與時間因素
DDA方法分析周期短、上手快;
SWATH需前期建立光譜庫,但一旦建成,可批量處理大量樣本,適合長期項目。
※ 總結:選擇技術,關鍵看“匹配度"
無論你正在進行基礎研究還是轉化醫學項目,選擇合適的采集模式都至關重要。SWATH-MS的高通量與重復性優勢,正在逐步成為標準化dànbáizhì定量的主流趨勢;而DDA-MS則仍是bùkětìdài的探索性工具。zuì佳策略,往往是將二者結合使用:前期DDA建立光譜庫,后期用SWATH進行大規模定量。百泰派克生物科技提供SWATH定量蛋白組學一站式解決方案,如需深入了解蛋白組學項目設計,歡迎聯系我們獲取免費的項目咨詢與技術建議。
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2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
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②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
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