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dànbáizhì是生命活動的執行者,從信號轉導到細胞結構維持wúsuǒbùzài。但dànbáizhì在翻譯完成后,并非立即具備生物活性,它們通常需要經歷一系列“翻譯后修飾"(Post-Translational Modifications, PTMs),才能實現功能激活、亞細胞定位調整或降解控制。這些修飾賦予dànbáizhì更豐富的功能層次,是細胞精密調控的關鍵方式。深入分析dànbáizhì的翻譯后修飾,不僅是基礎生命科學研究的核心任務,也是疾病機制揭示與靶點發現的關鍵途徑。
一、dànbáizhì翻譯后修飾的多樣性與功能意義
dànbáizhì翻譯后修飾是在dànbáizhì合成后,通過酶促或非酶促方式引入化學基團或結構改變的分子事件。目前已鑒定的PTM種類超過400種,zuì常見的包括:
磷酸化(Phosphorylation):發生在Ser、Thr、Tyr殘基,是信號轉導通路的核心調控機制;
乙酰化(Acetylation):常見于賴氨酸殘基,參與染色質重構與轉錄調控;
泛素化(Ubiquitination):通過連接泛素多聚鏈決定dànbáizhì降解或功能調節;
甲基化(Methylation):影響基因表達、表觀遺傳狀態;
糖基化(Glycosylation):關鍵于細胞間識別、dànbáizhì穩定性與免疫調控;
硝化、羥基化、棕櫚酰化、硫酸化等:涉及線粒體功能、受體激活、dànbáizhì膜錨定等多方面調控。
這些修飾廣泛分布于哺乳動物、植物、微生物等不同生物體,參與細胞周期、代謝穩態、應激反應乃至病理狀態(如腫瘤、自身免疫疾病、神經退行性疾病)的調控網絡。
二、翻譯后修飾研究的分析策略
當前,質譜技術(Mass Spectrometry, MS)無疑是PTM研究的核心平臺。基于高分辨率質譜的dànbáizhì組學方法,能夠在不依賴抗體的前提下,實現對全局修飾位點的高通量、定量識別。其基本流程包括:
1、蛋白提取與酶解
通常使用yídànbáiméi將復雜樣本中的dànbáizhì切割為肽段,以暴露潛在的修飾位點。為了提高修飾肽的檢出率,需特別優化裂解條件,避免修飾丟失。
2、富集修飾肽段
由于修飾肽段豐度低、信號弱,必須通過特異性富集手段進行前處理。例如:
磷酸化肽可用TiO?或Fe-NTA柱富集;
泛素化殘基可通過K-ε-GG抗體識別特異性標記;
乙酰化肽常用抗體免疫沉淀或強陽離子交換色譜(SCX)富集。
3、液相色譜-質譜聯用分析(LC-MS/MS)
采用納流液相色譜(nanoLC)與高分辨率質譜(如Orbitrap、Q Exactive)聯用,可實現修飾肽段的分離與鑒定。串聯質譜(MS/MS)進一步對肽段碎片進行結構解析,實現修飾位點的jīngquè定位。
4、數據分析與注釋
修飾肽段的識別通常依賴MaxQuant、Proteome Discoverer等軟件,結合Unimod數據庫對修飾類型進行匹配。為提高可信度,研究者需設定嚴格的FDR(jiǎfā現率)閾值,并結合手動驗證與生物學重復評估數據可靠性。
三、特定修飾類型的研究亮點
1、磷酸化dànbáizhì組學
磷酸化是研究zuì深入的PTM類型之一,在信號通路研究中應用廣泛。高通量磷酸化組分析已成功揭示如EGFR、MAPK等關鍵通路的激活位點,在腫瘤靶點篩選中具有廣泛應用。
2、泛素化和SUMO化
泛素化研究逐漸由蛋白降解功能拓展至信號調控與應激反應。近年來,小泛素樣修飾(SUMOylation)因其在DNA修復和病毒感染過程中的重要性而受到關注,成為dànbáizhì穩態研究新熱點。
3、糖基化與免疫相關機制
糖基化修飾在細胞識別和免疫逃逸中的角色尤為關鍵,N-糖基化與O-糖基化異常被證實與癌癥免疫抑制機制密切相關。MS結合糖譜分析為抗體藥物優化和生物制劑純化提供重要支撐。
dànbáizhì翻譯后修飾研究正從“dànbáizhì功能注解的補充"上升為“細胞調控研究的核心",是理解復雜生命現象bùkěhuòquē的一環。無論是信號通路構建、疾病標志物篩選,還是藥物靶點發現,PTM分析都提供了bùkětìdài的視角。而要高效開展PTM研究,不僅需要強大的實驗平臺,更離不開標準化、系統化的技術服務支持。百泰派克生物科技依托豐富的質譜分析經驗與全面的dànbáizhì組學解決方案,致力于為科研工作者提供高質量的翻譯后修飾蛋白組分析服務,助力揭示細胞調控的核心機制,加速科研成果轉化。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
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6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
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單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
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②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
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百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。
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