2D-DIGE定量蛋白質組學檢測技術服務詳情介紹

dànbáizhì組學是一門以dànbáizhì組為研究對象，旨在研究細胞、組織或生物體組成及其變化規律的學科。自從1975年O'Farrell和Klose等人建立雙向凝膠電泳技術（2-DE）以來，2-DE技術憑借其高靈敏度和高分辨率、便于計算機進行圖像分析處理、可以很好地與質譜分析等鑒定方法匹配等優點成為目前dànbáizhì組學研究的核心手段。

近年來，dànbáizhì組學的研究重點已從dànbáizhì的鑒定到量化轉移。定量的dànbáizhì組學研究可定義為多個樣品間dànbáizhì豐度相對差異的研究。盡管一些可選擇的或互補的dànbáizhì組學技術正在發展，如同位素親和標簽和多維dànbáizhì鑒定技術，但雙向電泳仍是當前僅有的可以同時分離大量的復雜的dànbáizhì混合物的關鍵技術。

傳統的雙向電泳2-DE在樣品制備、電泳條件及凝膠染色等方面難以保證wánquán一致，因此容易產生膠間差異。這種差異會導致試驗的重復性不佳，敏感度較低，甚至可能掩蓋真實的生物學差異或產生誤導性的假陽性結果。為了解決2-DE技術存在的缺陷，1997年Unlü et al提出了雙向熒光差異凝膠電泳（Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis，2D-DIGE）。

2D-DIGE 技術的原理是先用不同的熒光染料標記dànbáizhì樣品，再使dànbáizhì變性，然后用固定pH梯度凝膠，根據dànbáizhì電荷差異分離出不同pH值的dànbáizhì帶，再將此膠條置于含SDS 的聚丙烯酰胺凝膠上，根據dànbáizhì分子量加以分離，并通過多通道激光掃描分析不同dànbáizhì的SDS-PAGE凝膠圖像。其主要步驟：用2種不同的熒光染料（Cy2、Cy3 或 Cy5）標記要比較的dànbáizhì樣品；等量均勻混合熒光標記后的樣品；使用相同的內標，將混合后的樣品經雙向凝膠電泳進行分離；在熒光顯微鏡下，用不同的激發波長來檢測電泳結果。

圖1. 2D-DIGE技術的一般流程

2D-DIGE相較于傳統的2-DE具有的顯著優勢：

• 采用熒光標記技術，能同時比較多個樣品，提高了實驗效率和準確性。

• 由于熒光標記的引入，使得dànbáizhì的分離和檢測更加jīngquè，可以檢測到更細微的dànbáizhì差異。

• 引入了內標，更好地消除了試驗的偶然誤差，避免了不同凝膠之間的差異，極大地提高了結果的準確性和可信度。

• 不需要進行電泳后的固定或脫色過程，減少了dànbáizhì特別是低分子量dànbáizhì的損失。

• 熒光信號的數字化處理使得數據的獲取和分析更加快速和準確。

百泰派克生物科技提供SDS-PAGE和2D-DIGE電泳服務，結合Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺與nanoLC-MS/MS納升色譜，為廣大科研工作者提供一站式dànbáizhì組定性及定量服務。

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