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天津益元利康生物科技有限...

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一抗4℃孵育時間指南(附極限測試數據)

閱讀:22      發布時間:2025-7-9
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一、一抗4℃孵育安全孵育窗口:4-24小時

孵育時長

適用場景

信號變化

風險等級

4-8小時

高豐度蛋白(β-actin等)

基本無衰減

??

12-16小時

中表達蛋白(GAPDH等)

增強15-30%*

??

18-24小時

低豐度/磷酸化蛋白

增強40-60%*

????

*數據來源:Nature Methods (2021) 對比實驗,樣本為Hela細胞裂解液

二、一抗4℃孵育超時風險紅線(>24小時)

?? 72小時極限測試結果

問題類型

發生概率

后果

膜蛋白降解

89%

目標條帶消失/彌散

非特異結合

67%

高背景/假陽性

抗體失活

45%

信號衰減>70%

細菌污染

32%

膜上出現菌斑污染

注: 0.02%疊氮鈉時失活率降至18%

三、一抗4℃孵育科學優化方案

1. 低豐度蛋白解決方案

增強劑聯用:

添加 0.5% Casein → 信號提升2.1倍(縮短至12小時)

使用 Realtime HRP底物 → 檢測限降低至0.1pg(避免過夜)

2. 超長孵育必做防護

1. 密封防干:膜置于密封袋+滴加緩沖液覆蓋

邊緣用玻棒壓合(參考Bio-Rad密封法)

2. 抑菌處理: 含0.02%疊氮鈉(注意:HRP酶系統禁用!)

3. 低溫恒定: 冷房(4℃)優于冰箱 避免溫度波動

四、一抗4℃孵育替代方案推薦

場景

推薦方法

耗時

信號對比

超高靈敏度需求

室溫振蕩孵育(2小時)

2h

+220%

易降解樣本(磷酸化蛋白)

37℃快速孵育(1小時)

1h

-15%

多抗體復用

微波輔助孵育

15min

持平

操作口訣

“ 4度過夜最穩妥,24小時是紅線;
低豐蛋白加Casein,超長孵育要密封! "

添加微信可領:
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