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HGC-27細胞培養指南 | 實驗步驟與防污染技巧(新手必讀)

閱讀:486      發布時間:2025-3-11
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HGC-27細胞是一種來源于人胃癌患者轉移性淋巴結的低分化胃癌細胞系,具有較強的侵襲性和增殖能力,常用于研究胃癌的分子機制、藥物篩選以及侵襲與轉移特性分析。它在體外呈上皮樣貼壁生長,呈多角形或短梭形,以單層形式生長。能夠在免疫缺陷小鼠中形成移植瘤,是胃癌相關研究的重要模型。

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一、實驗準備(關鍵物料清單)

細胞來源:建議從ATCC/中科院細胞庫獲?。ㄅ柨伤菰矗?br style="--tw-border-spacing-x:0; --tw-border-spacing-y:0; --tw-translate-x:0; --tw-translate-y:0; --tw-rotate:0; --tw-skew-x:0; --tw-skew-y:0; --tw-scale-x:1; --tw-scale-y:1; --tw-pan-x: ; --tw-pan-y: ; --tw-pinch-zoom: ; --tw-scroll-snap-strictness:proximity; --tw-gradient-from-position: ; --tw-gradient-via-position: ; --tw-gradient-to-position: ; --tw-ordinal: ; --tw-slashed-zero: ; --tw-numeric-figure: ; --tw-numeric-spacing: ; --tw-numeric-fraction: ; --tw-ring-inset: ; --tw-ring-offset-width:0px; --tw-ring-offset-color:#fff; --tw-ring-color:#3b82f680; --tw-ring-offset-shadow:0 0 #0000; --tw-ring-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow-colored:0 0 #0000; --tw-blur: ; --tw-brightness: ; --tw-contrast: ; --tw-grayscale: ; --tw-hue-rotate: ; --tw-invert: ; --tw-saturate: ; --tw-sepia: ; --tw-drop-shadow: ; --tw-backdrop-blur: ; --tw-backdrop-brightness: ; --tw-backdrop-contrast: ; --tw-backdrop-grayscale: ; --tw-backdrop-hue-rotate: ; --tw-backdrop-invert: ; --tw-backdrop-opacity: ; --tw-backdrop-saturate: ; --tw-backdrop-sepia: ; box-sizing: inherit;"/>? 培養基:RPMI-1640 + 10% FBS + 1%雙抗(Gibco品牌優選)
儀器:37℃恒溫CO?培養箱(CO?濃度5%)、生物安全柜(潔凈度100級)

二、詳細培養步驟

1. 復蘇操作

快速解凍37℃水浴≤2分鐘離心去DMSO1000rpm×5min重懸接種初始密度2×10? cells/cm2

?? 防凍傷要點:解凍后立即轉移至預溫培養基

2. 傳代方法

  • 消化控制:0.25%胰酶(含EDTA)作用2-3分鐘(鏡下觀察細胞變圓)

  • 終止技巧:加入含血清培養基(體積≥3倍消化液)

  • 分瓶比例:1:3至1:4(24-48小時可達80%融合度)

3. 凍存方案

  • 凍存液配方:90% FBS + 10% DMSO(現用現配)

  • 程序降溫:4℃ 30min → -20℃ 2h → 液氮長期保存

三、培養問題排查(附解決方案)

常見問題原因分析應對措施
增殖緩慢血清批次差異/FBS濃度不足更換優質血清(≥南美產地)
細胞漂浮消化過度/支原體污染縮短消化時間/PCR檢測
黑點污染真菌孢子污染棄用全批+環境紫外滅菌

?? 注意事項(提升實驗成功率)

  • 狀態監控:每日觀察細胞形態(貼壁率<50%需排查)

  • 傳代周期:不超過30代(建議定期STR鑒定)

  • 污染預防:操作前紫外滅菌30min,試劑瓶酒精噴淋


ATCC代理——天津益元利康生物科技有限公司,成立于2018年,坐落于天津經濟技術開發區。公司產品線涉及細胞與基因治療、免疫學、分子生物學、細胞生物學等多個方向,專注于生命科學試劑、耗材、細胞、儀器等產品銷售,經營的品牌主要有:ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam、BioLegend等等。我們提供質優價美的產品、及時到位的服務,努力成長為生命科學和生物技術企業的優質供應商。

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