酶聯免疫吸附測定法 (enzyme-linked immunosorbent assay)，簡稱 ELISA，是用于檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法。它是一種特殊的試劑分析方法，是在免疫酶技術( immunoenzymatic techniques ) 的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術。那么你知道ELISA實驗的關鍵點是什么嗎？讓我們一起來看看吧！
一、樣本的儲存
合適的保存環境可以確保生物樣本在后續實驗和研究中的可靠性和穩定性，樣本長期保存建議在-80℃保存，1-2個月內在-20℃保存，開展檢測時需分裝后保存4℃，并建議當天短暫保存，單次使用后丟棄剩余部分。
為避免樣本的蛋白質結構和活性受損，盡量避免多次凍融，凍融次數對檢測結果的的影響是不容小覷的。經測試對比發現：有些因子凍融2到3次甚至已經降到非常低的含量水平，如大家經常關注到的炎癥因子IL-1β、IL-15、IL-17、CXCL8等。
二、樣本內外源性物質
免疫方法檢測中，內源性等因素干擾(自身抗體、異嗜性抗體、人抗動物抗體及其他一些結合蛋白等)、脂血、交叉反應、一些分析前變異(標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存過久、標本凝集不全和采血管中添加物等)、基質效應甚至檢測設備的不同，均可對檢測結果造成干擾，引起許多檢測結果的假性升高或降低，包括激素、各類標志物、藥物和病原微生物的血清學檢測等。
科研人員應充分認識免疫檢測中的各類干擾因素，在出現結果不符(包括檢測結果與臨床癥狀不符、檢測預期與文獻不符)時進行原因分析，如檢測的樣本類型是否與所選試劑盒匹配。
三、樣本造模
生物學實驗中影響造模成功的因素很多，需要綜合考慮各種因素，以確保模型的可靠性和準確性：
設置對照：在實驗造模中，設置對照可以幫助確定造模是否成功。例如，實驗組和對照組在實驗處理后表現出不同的生理或生化反應，則可以認為造模是成功的。此外，通過對照還可以評估實驗的可靠性，例如評估實驗結果的重復性和穩定性。
多學科驗證：在生物學實驗中，確定造模和對照是否成功需要考慮多個方面。如：觀察實驗動物病理癥狀、檢測生理指標、檢測生化指標、組織病理學檢查、統計學分析等；
實驗動物：不同種類的實驗動物對模型的反應可能不同。例如，某些藥物在小鼠和大鼠中的反應可能會有所不同。因此，選擇適當的實驗動物種類對于造模成功至關重要。
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