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磷酸化蛋白研究方法之wako預制膠

閱讀:865      發布時間:2024-1-18
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磷酸化蛋白對細胞通路的重要性毋庸贅述,這種關鍵的翻譯后修飾參wako預制膠與wako預制膠廣泛的細胞活動調節,包括細胞周期、細胞分化、代謝和神經元通訊等。蛋白磷酸化的異常也與眾多疾病相關,是疾病機理研究的重要研究方向。那么你知道磷酸化蛋白研究方法嗎?讓我們一起來看看吧!

    Western Blot是評估蛋白磷酸化狀態的常用方法,且大部分實驗室具備開展該實驗的條件。用SDS-PAGE分離生物樣品,隨后轉移到膜(PVDF或硝酸纖維素膜),采用磷酸化抗體鑒定目的蛋白的磷酸化水平。

    由于磷酸化蛋白的檢測結果可能隨樣本處理或操作誤差而變化,研究人員通常用同一種蛋白的總表達水平作為參考,通過確定磷酸化蛋白和總蛋白的相對比值來反映磷酸化情況,判斷信號通路是否被激活。

    SuperSep™Phos-tag™是一種預制膠,預先加入50μmol/L的Phos-tag™Acrylamide,打開包裝即可直接使用。預制膠中含有Zn2+作為金屬離子,在中性凝膠緩沖液中保存穩定性很好,得到的結果條帶也很整齊。wako預制膠即開即用,使用起來安全可靠,有效期長達6個月,操作方法與普通無二。

SuperSep™Phos-tag™預制膠的應用

電泳條件:30mA(恒流),60 min

樣品:5μg/Laneα-酪蛋白(含磷酸化與去磷酸化a-酪蛋白)

普通SDS-PAGE只觀察到一條條帶,而Phos-tag™ SDS-PAGE里可見α酪蛋白磷酸化和α-酪蛋白去磷酸化兩條條帶。

樣品緩沖液:Sample Buffer Solution(2ME+)(X4)

電泳緩沖液:SDS-PAGE緩沖液,pH8.5

染色:QUICK-CBB PLUS

  P10%(左):SuperSep Phos-tag™(50 μmol/L),10%,13 well

  P15%(中):SuperSep Phos-tag™(50 μmol/L),15%,13 well

  A15%(右):SuperSep™ Ace,15%,13well(不含Phos-tag™)

SuperSep™ Phos-tag™預制膠對比圖

更多有關磷酸化蛋白研究方法之wako預制膠,請聯系天津益元利康生物科技有限公司。


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