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液相色譜法檢測人血漿中頭孢丙烯順式和反式異構(gòu)體
頭孢丙烯為第二代頭孢菌素類抗生素，具有廣譜抗菌作用。臨床用于治療敏感菌所致的輕、中度感染。頭孢丙 烯中順式異構(gòu)體的含量在90%以上，而反式異構(gòu)體只占10%以下。順反式異構(gòu)體在化學(xué)穩(wěn)定性和抗革蘭陽性鏈球菌和葡萄球菌活性方面是相同的，但在抗革蘭陰性大腸埃希桿菌、肺炎克雷伯菌等方面，順式的抗菌活性是反式的6～8倍。
可采用液相色譜同時測定人血漿中順式（Z）和反式（E）異構(gòu)體濃度。
檢測所需儀器
液相色譜儀，配有 工作站； 旋渦混合器； 高速臺式離心機(jī)。
色譜條件
色譜柱：（200×4.6 mm，5μm）；流動相：0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液（磷酸調(diào)pH值2.50）-乙腈（88：12）；檢測波長：280nm；柱溫：30 ℃；流速：1.2 ml/min；進(jìn)樣量：50μl。
測定方法
1 精密量取血漿樣品500μl，加入內(nèi)標(biāo)（100.2μg/ml頭孢拉定）50μl，20%三氯醋酸100μl，漩渦混合1分鐘，離心6分鐘，取上層液，依次加入乙腈0.5ml和二氯甲烷2ml，振蕩6分鐘，離心6分鐘，取上層液離心6分鐘，取50μl上清液進(jìn)樣分析。
2 精密量取空白血漿500μl，分別加入順式（Z）和反式（E）異構(gòu)體標(biāo)準(zhǔn)系列溶液各50μl，配制成血漿中順式（Z）異構(gòu)體濃度為0.1003，0.3008，1.0025，2.0050，4.0100，8.0200，16.0400μg/ml和反式（E）異構(gòu)體濃度為20.0，40.1，100.2，200.4，400.8，1002.0，1603.2ng/ml的血漿樣品，按“血漿樣品處理”項(xiàng)下自“加入內(nèi)標(biāo)溶液”起同法試驗(yàn)，以待測物濃度為橫坐標(biāo)X，待測物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值（AS/Ai）為縱坐標(biāo)Y，用加權(quán)zui小二乘法[2]（權(quán)重系數(shù)：1/X2）進(jìn)行線性回歸運(yùn)算，求得的線性回歸方程即為標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。