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免疫測定技術的基礎在于抗原抗體之間的特異結合反應,所以任何優質的診斷試劑離不開優質的原料,如抗原抗體,酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術得到的單克隆抗體,而抗原或抗體的標記物如酶標結合物則通過各種化學合成方法制備。近年來,隨著分子生物學的發展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結合物等免疫測定試劑幾成為現實的新一代試劑,各種新型使用的測定方法也不斷出現。
山羊骨成型蛋白4(BMP-4)吸附試劑盒
在進行酶聯免疫吸附劑測定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)實驗中,有很多需要注意的地方,由于ELISA方法廣泛應用在各種抗原和抗體的此定中。但是測定中的影響因素很多,并且對操作有較高的要求,所以,在實驗中除了正常的相互反應,還會出現錯誤的反應,導致錯誤的結果。
而造成這種錯誤的可能因素有:標本因素;試劑因素;操作因素等。
為此,上海勁馬針對常見問題做分析如下:這里我簡單的總結一下:
ELISA 試劑盒標準操作要點
無論在什么研究中,優質的試劑、良好的和正確的操作是保證ELISA 檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA 中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的和高質量的純化水電導率小于1.5μs/cm。
A 標本的采取和保存
大部分ELISA 檢測均以血清為標本。血清標本可按常規方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以HRP 為標記的ELISA 測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會產生假陽性反應。一般說來,在5 天內測定的血清標本可放置于4℃,標本在冰箱中保存時間過長導致血清IgG 聚合,使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。凍結血清融解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻并避免產生氣泡。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾,澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。
保存血清自采集時就應注意無菌操作,也可加入適當防腐劑。
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