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SRM998血管緊張素I(美國nist標準品)
  • SRM998血管緊張素I(美國nist標準品)
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貨物所在地:廣東東莞市

地: 美國

更新時間:2025-03-25 14:19:33

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SRM998血管緊張素I(美國nist標準品)主要用于腎素測定的校準和標準化,以及作為氨基酸分析和高效液相色譜法(HPLC)的參考肽。

SRM998血管緊張素I(美國nist標準品)主要用于腎素測定的校準和標準化,以及作為氨基酸分析和高效液相色譜法(HPLC)的參考肽。


SRM 998的一個單位由0.5 mg化學合成的血管緊張素Ⅰ組成。


經認證的血管緊張素Ⅰ純度值通過HPLC進行評估,并通過核磁共振(NMR)在報告的不確定性范圍內間接確認。在HPLC程序中,肽含量通過標準添加法測量,使用溶解在1 mol/LKOH 中的苯丙氨酸作為添加標準。SRM溶液和添加的標準溶液在6 mol/LHCl中水解并測定氨基酸組成。苯丙氨酸濃度通過絕對重量和通過測量標準溶液的吸光度并使用表觀比摩爾吸光度209±0.2L/gcm 計算濃度來確定。苯丙氨酸與四種氨基酸(緬氨酸、亮氨酸、組氨酸和精氨酸)中每一種的濃度比用于計算每個樣品中總肽的量。所有報告的不確定度均表示為所列值的正負一個標準誤差。參考醋酸鹽含量值由單—方法確定。


SRM998血管緊張素I(美國nist標準品)應存放在-20°C的密封玻璃安瓿中,在打開前應允許加熱到房間溫度。


該材料是從貝克曼儀器公司,生物產品業務(帕洛阿爾托,加利福尼亞州)。

使用在 5000 kPa 壓力下操作的 25 cm x0.4 cm 十八烷基硅烷柱對溶解的 25 ug 該 SRM 998  血管緊張素I  標準品樣品進行液相色譜分析。樣品已溶解在 8l 體積份 0.l molL 三乙胺磷酸鹽緩沖液(pH 3.5)和 19 體積份乙腈溶液中。使用了兩種溶液:一種是用于溶解 SRM 的相同成分的溶液;另一種是用于溶解 SRM 的溶液。另一種是75體積份緩沖液與25體積份乙腈的溶液。通過在 215 nm 和 280 nm 處測量吸光度來監測洗脫。在 81:19 的洗脫液比下,在 2l5 nm 處檢測到保留時間分別為 16.6 minutcs 和 12.2 min 的主峰和次峰,在 280 nm 處僅檢測到主峰。每個峰對應的物質為收集,在 6 molL HCl 中水解并分析氨基酸組成。主峰的氨基酸含量表明它是血管緊張素 I。次峰(<1% 的 215 nm 吸光度)不含可檢測到的肽材料。在這些 HPLC 條件下,乙酸鹽聚集在溶劑前沿并且無法定量。在 75:25 的洗脫液比例下,在該波長處未檢測到額外的峰,表明不存在非肽、UV 吸收材料。

用4 0 0 MHz核磁共振波譜儀在脈沖傅里葉變換模式下測定了6種SRM樣品的乙酸含量。用整個樣品(約0.5mg)在0.5mL氧化氘(100原子%D)中溶解,制備了分析溶液。在Cach溶液中加入少量的鈉-4,4-二甲基-4-硅戊酸酯2,2,3,3-DS作為內參。由于在8.1.922處發現乙酸甲酯質子信號與血管緊張素l的質子信號重疊,因此血管緊張素Ⅰ的一種乙酰丙酮法初步準備用于確定乙酸酯峰下信號的準確質子計數。用0.02 mol HCl對該樣品進行了兩次凍干處理,結果表明,該樣品不含乙酸酯,其光譜感興趣區為3個。在此基礎上,對THC SRM樣品進行了不凍干分析,從縮醛甲基峰及其信號的總積分中減去三個質子的適當積分值,得到乙酸峰的積分。三個質子積分的適當值是通過在高能量區總共29個質子信號的積分平均值確定的,其中包括許多源自血管緊張素l的甲基、甲基和甲基質子的質子信號。質子信號的數字積分用圖表紙繪制,并進行了處理。使用下列儀器參數:數據集的大小,16384點;4 US(30°翻轉角);光譜寬度,4 kHz,掃描次數,2000年;弛豫延遲,1.95秒。



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