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分子實驗分子互作:EMSA凝膠遷移阻滯實驗

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更新時間:2025-07-03 15:29:35瀏覽次數:371次

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EMSA技術即凝膠遷移或電泳遷移率實驗,用于研究DNA/RNA結合蛋白和其相關的DNA/RNA結合序列相互作用的技術

一、技術簡介

EMSA技術即凝膠遷移或電泳遷移率實驗,用于研究DNA/RNA結合蛋白和其相關的DNA/RNA結合序列相互作用的技術;


二、技術原理

將純化的蛋白或細胞粗提液與標記的DNA或RNA探針一同孵育,在非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳中,DNA-蛋白或RNA-蛋白復合物的遷移率比未結合的探針慢,從而檢測到活化的與DNA或RNA結合的蛋白轉錄或調節因子。

分子實驗分子互作:EMSA凝膠遷移阻滯實驗


三、應用場景

1.基因表達調控研究:確定轉錄因子與DNA的結合位點和結合特性,研究基因表達的調控機制。

2.疾病機理研究:分析疾病相關基因的表達調控異常,探索疾病的發生發展機制。

3.藥物靶點發現:篩選和鑒定與疾病相關的DNA結合蛋白,為藥物研發提供靶點。

4.信號通路研究:研究信號通路中DNA結合蛋白的活性變化及其對下游基因的影響。


四、技術優勢

1.實驗操作相對簡單,對實驗條件要求不苛刻。

2.可檢測多種核酸分子大小和結構以及廣泛的蛋白大小范圍,能在單個反應體系中檢測不同蛋白與不同核酸分子的結合情況。

3.生物素標記探針穩定、安全、準確且親和力高。


五、樣本類型

新鮮細胞(貼壁細胞/懸浮細胞)、凍存細胞、凍存組織、細胞核蛋白樣本或純化的轉錄因子,部分實驗亦可使用重組表達的蛋白。


六、樣本需求

細胞樣本:約1×10^7個(可以是1個10cm皿,或以懸浮細胞形式存儲于離心管中,或1個T75瓶);

凍存組織:約400mg;

植物組織:約2g;細胞核蛋白、純化轉錄因子、重組表達蛋白等:每張膜至少提供50ul,濃度不低于0.5mg/ml。


七、樣本準備&運輸

活細胞樣本:距離較近的可以將養在皿/T75瓶/離心管內的新鮮細胞樣本常溫快遞(最遲次日達)運輸,本市內可閃送或親自遞送,距離較遠的,可-80℃凍存細胞干冰運輸;

組織樣本&其他液體樣本:-80℃凍存干冰運輸。


八、需提供的試劑

結合蛋白特異性抗體50ul以上,濃度大于0.5mg/ml。


九、實驗周期

2-3周


十、其他

探針序列,如無探針序列,請提供DNA結合蛋白相關信息或相關文獻。


分子實驗分子互作:EMSA凝膠遷移阻滯實驗




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