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PCR 操作中必知的 6 大細節

時間:2023/5/5閱讀:1606
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1、最好使用一次性進口 tip 頭,以避免液體殘留;同時,tip 頭不要長時間暴露于空氣中,避免氣溶膠的污染。

2、加樣時,tip 頭要伸入 PCR 反應管的液面下一點,然后將液體緩緩打入液面下,至恰好打出一個小氣泡為至;加樣過程最好在冰塊上操作;移液槍用完之后要歸到最大計量的位置,防止久而久之彈簧失去彈性,而導致加樣量的不準確。

3、配制反應體系時,若反應物為凍結制品,需在融解后上下顛倒輕輕均勻混合;加入試劑之前,把它混勻一下,以免放置時間長了濃度不均;按照液體體積由大到小的順序將反應物加入到 PCR 管中;引物和模板和體系所加的比例要合適,模板過量反而會抑制體系的反應。

4、 操作多份樣品時,可先制備反應混合液,即將 dNTP、緩沖液、引物和酶混合好后分裝,這樣即可避免污染,又可增加反應的精確度。

5、避免反應液飛濺,打開反應管時為避免此種情況,開蓋前稍離心;PCR 產物的電泳檢測時間一般為 48h 以內,有些最好于當日電泳檢測,大于 48h 后帶型不規則甚至消失。

6、如凝膠分析擴增產物只有一條帶,不需要用凝膠純化。如可見其他雜帶,可能是積累了大量引物的二聚體。少量的引物二聚體的摩爾數也很高,這會產生高比例的帶有引物二聚體的克隆,而非目的插入片段。為此需在克隆前做凝膠純化。


深圳安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、壹流的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業。總部設在廣東,服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司,旨在為生命科學的發展提供壹流的產品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經科學等領域的產品供應線,在各個領域內向用戶提供世界前沿水平和質量穩定的產品,安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等優質客戶提供優質的產品、技術支持與服務。


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