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細胞復蘇

時間:2023/1/11閱讀:1327
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簡介

細胞復蘇是將凍存在液氮中的細胞解凍之后重新培養,細胞恢復生長的過程。

材料與儀器

器材:37℃ 水浴箱、離心機、無菌試管以及培養瓶。
 
試劑:
 
① 含 20% 血清 RPMI 1640 培養液;

 

步驟

細胞復蘇的基本過程可分為如下幾步:
 
A 從液氮中取出細胞安瓿或凍存管,置 37℃ 水浴中迅速融化,一旦冰塊消失即將凍存管從水浴中取出。
 
B 用 70% 乙醇擦洗凍存管外部以減少污染機會。
 
C 吸取凍存管內容物緩慢加入含 4-5 ml 培養液的 T-25 細胞培養瓶中,置 5%CO2、37℃ 細胞培養箱培養,次日換液。也可通過離心去除細胞保護劑,再進行細胞培養。

 

注意事項

凍存細胞并非能達到 100% 復蘇成功。復蘇失敗可能與以下因素有關,凍存時細胞數量少或生長狀態不良;細胞受細菌或支原體污染;液氮罐保管不善;復蘇時培養條件改變,如將胎牛血清換成小牛血清;復蘇方法不得當等。


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