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凍存細胞的這些坑,你踩過嗎?

時間:2021/9/23閱讀:2495
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凍存細胞的錯誤時機主要有:細胞量太少,細胞狀態不好,細胞變形嚴重,或者細胞生長堆積,一旦生長過平頂期,培養基就會變得很黃,細胞可疑污染;鏡下觀察細胞有很多碎片或者不明物;培養時間過長,連續培養超過二個月,細胞性狀已有改變。

選擇細胞凍存的最佳時機:細胞增殖旺盛,情況穩定,試驗效果良好,復蘇后兩周內開始凍存一批,再往下傳的用來做實驗。


細胞太少

凍存時細胞濃度低于1- 5*10^5CELL/VIAL,復蘇很難成功,原因:細胞和細胞間會又間隙接觸反應, 解決:離心后調整細胞濃度,把細胞種更小的孔板中.


培養基很黃,凍存細胞后復蘇不長

在細胞生長平頂期凍存的細胞會在解凍后有幾天停滯狀態,原因:細胞在生長平頂期已經停止生長,凍存后也保持互相間抑制的信號,解決辦法:用胰酶消化重新鋪板;


細胞污染或者很多小黑點

凍存管的蓋子一定要擰緊,否則復蘇水浴時會滲水,造成污染。復蘇細胞的時候盡量避免凍存管接縫處沾水,防止支原體污染,實驗室定期用過氧化氫熏蒸,細胞小黑點增多時用支原體檢測試劑盒檢測,并且及時清除,趁高溫假給細胞來次清潔吧,支原體去除試劑,*防止支原體污染好幫手


程序降溫盒導致的細胞復蘇不活

放在-80 度的凍存盒,壁太薄,細胞在被迅速降溫,使用普通的凍存液抗氧化和抗凍添加物不夠,導致細胞內產生大量冰晶殺死細胞.

推薦品牌無血清細胞凍存液,凍存液含有抗氧化因子,可在細胞凍存時防止細胞產生氧化反應,給細胞一個好的休眠環境,含有抗凍組分,讓大部分細胞免受冰晶殺戮,好不好用一下就知道!


-80°存放太久導致的細胞復蘇不好

原因:冰箱的溫度難以恒定:開門 / 關門過于頻繁,冰箱電壓不穩等.解決辦法:盡快轉入液氮。


液氮不足

液面不能漫過所有細胞。解決:定期測量液氮儲備,保證細胞全部浸在液面下,小提醒:有幾個細胞需要氣相保存的,不能浸入液氮里,挪細胞的時候需要注意一下。


取錯細胞

找不到 / 拿錯凍存管。原因:沒有標記好細胞,沒有做好庫存記錄,解決:凍存細胞時在每支凍存管都標上細胞的名稱,凍存時間,并記錄在冊。

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