一、TA1535Ames菌株產品介紹

 

　　遺傳毒性試驗在食品、藥物、化妝品、環境等各領域安全檢測及評價上得到了廣泛應用。其中比較常見的是TA1535Ames菌株試驗，也是經典的測試化學物或藥物致突變實驗，該法測定主要在培養皿中進行，具有簡單、快速、精確而又靈敏的特點，被世界各國廣泛采用。為了使以上試驗條件更接近于哺乳動物的代謝情況，在測試系統中加入哺乳動物微粒體酶（S9)，可彌補體外試驗缺乏代謝活化系統之不足。

 

　　齊氏生物提供的沙門氏菌株（TA97a、TA98、TA100、TA102、TA1535）TA1535(Ames試驗）和WP2uvrA大腸桿菌(Ames試驗），經過鑒定，菌株特性與活菌數量符合Ames試驗國家標準，并以甘油菌的形式提供，融化后可直接使用。為了保證試驗效果，建議搭配齊氏生物研發的S9代謝活化系統一起使用。

 

　　二、保存條件

 

　　干冰運輸，-80℃保存。

 

　　三、TA1535Ames菌株注意事項

 

　　1、在使用過程中要特別注意避免培養基污染菌株。

 

　　2、本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

 

　　3、為了您的健康和安全，請穿實驗服并戴好一次性手套進行無菌操作。

 

　　四、鑒定項目

 

　　1、脂多糖屏障丟失（rfa）用接種環或一端撓起的接種針以無菌操作術取各菌株的增菌培養液，在營養瓊脂平板上分別劃平行線，然后用滅菌尖頭鑷夾取滅菌濾紙條，浸濕結晶紫溶液，貼放在平板上與各接種平行線垂直相交。蓋好皿蓋后倒置于37t溫箱，培養24h后觀察結果。

 

　　2、R因子劃線接種，貼放濾紙條及培養等均同上，唯濾紙條浸濕的藥液不同，為氨芐青霉素鈉溶液。TA102除pKM101外，還有pAQ1，載有抗四環素的基因，故另用濾紙條浸濕四環素溶液后貼放于劃線接種的平板上。

 

　　3、紫外線損傷修復缺陷（△uvrB）在營養瓊脂平板上按上述方法劃線接種后，一半接種線用黑玻璃遮蓋，另一半暴露于紫外光下8sec，然后蓋好皿蓋并用黑紙包裹平皿，防止可見光修復作用。培養同上。

 

　　4、自發回變預先制備底平板；向滅菌并在水浴內保溫45℃的上層軟瓊脂中注入0.1ml菌液；混勻后傾于底平板上并鋪平。平皿倒置于37℃溫箱培養48h。

 

　　5、回變特性——診斷性試驗上層軟瓊脂中除菌液外，還注入已知陽性物之溶液，需活化系統者并加入S9mix，余同上。

 

　　6、斑點試驗吸取測試菌增菌培養后的菌液0.1ml，注入融化并保溫45℃左右的上層軟瓊脂中，需S9活化的再加0.3ml－0.4mlS9mix，立即混勻，傾于底平板上，鋪平冷凝。用滅菌尖頭鑷夾滅菌圓濾紙片邊緣，紙片浸濕受試物溶液，或直接取固態受試物，貼放于上層培養基的表面。同時做溶劑對照和陽性對照，分別貼放于平板上相應位置。平皿倒置于37℃溫箱培養48h。在紙片外圍長出密集菌落圈，為陽性；菌落散布，密度與自發回變相似，為陰性。

 

　　7、平板摻入試驗將一定量樣液和0.1ml測試菌液均加入上層軟瓊脂中，需代謝活化的再加0.3ml－0.4mlS9mix，混勻后迅速傾于底平板上鋪平冷凝。同時做陰性和陽性對照，每種處理做3個平行。試樣通常設4個～5個劑量。選擇劑量范圍開始應大些，有陽性或可疑陽性結果時，再在較窄的劑量范圍內確定劑量反應關系。培養同上。同一劑量各皿回變菌落均數與各陰性對照皿自發回變菌落均數之比，為致變比（MR）。MR值≥2，且有劑量-反應關系，背景正常，則判為致突變陽性。