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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

PriCells: ?;蜇i大血管原代內皮細胞的分離-灌注酶消化法

時間:2021-9-23 閱讀:230
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PriCells: ?;蜇i大血管原代內皮細胞的分離-灌注酶消化法
實驗材料:
1.    ?;蜇i
2.    PBS,含青霉素100U/ml和鏈霉素100μg/ml
3.    0.1%Ⅰ型膠原酶
4.    眼科剪,眼科鑷
5.    慕絲線

6.    離心管(15ml、50ml)


實驗方法:
1.    分離牛或豬的主動脈等大血管,長15-20cm,用絲線結扎血管各分支后,取出主動脈。放入含青霉素100U/ml和鏈霉素100μg/ml的PBS中,清洗血管,洗凈血跡。
2.    用眼科剪和眼科鑷剔除血管外膜的脂肪和結締組織,用加入抗菌素的PBS沖洗三次。
3.    從血管動脈端注入0.1%Ⅰ型膠原酶溶液,待血管內殘留的PBS全部流出后,結扎血管靜脈端,繼續注入膠原酶溶液,使血管充盈。在室溫下消化約30min。
4.    將血管內消化液收集到滅菌的離心管內,1000r/min,離心10min。吸去上清,加入培養液制成細胞懸液。調整細胞密度至1.5×105個/ml。
5.    PriCells-原代內皮細胞特制基礎培養基
6.    PriCells-原代內皮細胞培養特制添加劑
7.    PriCells-原代細胞分離試劑盒


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