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小鼠垂體細(xì)胞(原代)

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更新時(shí)間:2025-02-11 18:40:28瀏覽次數(shù):184次

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一、小鼠垂體細(xì)胞簡(jiǎn)介 垂體,位于丘腦下部的腹側(cè),為一卵圓形小體

一、小鼠垂體細(xì)胞簡(jiǎn)介

垂體,位于丘腦下部的腹側(cè),為一卵圓形小體。是身體內(nèi)最復(fù)雜的內(nèi)分泌腺,所產(chǎn)生的激素不但與身體骨骼和軟組織的生長(zhǎng)有關(guān),且可影響內(nèi)分泌腺的活動(dòng)。垂體可分為腺垂體和神經(jīng)垂體兩大部分。神經(jīng)垂體由神經(jīng)部和漏斗部組成。垂體借漏斗連于下丘腦,呈橢圓形,位于顱中窩、蝶骨體上面的垂體窩內(nèi),外包堅(jiān)韌的硬腦膜。位于前方的腺垂體來(lái)自胚胎口凹頂?shù)纳掀つ遥≧athke囊),腺垂體包括遠(yuǎn)側(cè)部、結(jié)節(jié)部和中間部;位于后方的神經(jīng)垂體較小,由第三腦室底向下突出形成(各部詳見(jiàn)組織學(xué))。
本公司生產(chǎn)的小鼠垂體細(xì)胞采用酶解法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×105/T25方瓶,細(xì)胞純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
二、 使用方法

1 您收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作:

取出 T25 方瓶, 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入 37 , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時(shí), 以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),然后打開(kāi)瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細(xì)胞的培養(yǎng)液(備注: 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細(xì)胞, 保存種子后再?lài)L試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細(xì)胞生長(zhǎng),以免使用自己培養(yǎng)液不適合細(xì)胞生長(zhǎng)造成細(xì)胞狀態(tài)不好或死亡 最后按照后面細(xì)胞傳代步驟進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
2 、細(xì)胞傳代:
1)細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí),棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液, PBS 清洗細(xì)胞 3 次;
2)添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm/min,離心 5min
3)棄上清,沉淀細(xì)胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸,然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代, 最后放入 37 ,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)待細(xì)胞貼壁后, 觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3 、細(xì)胞凍存
1)細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí),棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次;
2)添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm/min,離心 5min
3)用適當(dāng)量的凍存液(培養(yǎng)液: FBSDMSO=7:2:1)重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中;
4)先將細(xì)胞凍存管放置于-20 1h,然后將其移入-80℃過(guò)夜, 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期儲(chǔ)存(或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長(zhǎng)期儲(chǔ)存)。
4、細(xì)胞復(fù)蘇:
1)從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具 快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無(wú)結(jié)晶,然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2)將凍存管中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含 5ml 培養(yǎng)液無(wú)菌離心管中,1000rpm 離心 5min ,然后加入 5ml 全培養(yǎng)液混勻細(xì)胞, 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶中, 放置于 37 , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
3
第二天,換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

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