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一、細胞基本屬性
細胞名稱：NB-4（人急性早幼粒白血病細胞）
細胞別稱：NB-4; NB4; NB.4
細胞貨號：SNL-175
細胞種屬：人
生長情況：懸浮
培養條件：1640+10%FBS+1%雙抗
培養環境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、細胞培養操作
換液周期：2-3天
培養基體積：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
傳代比例：1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）
傳代方法：
1.混勻細胞，收集細胞培養基，900rpm離心3-5min，棄上清；
2.加新的*培養基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養瓶里；
3.補足*培養基，將培養瓶放回培養箱靜置培養；
注意事項：部分懸浮細胞會附著瓶底，輕輕晃動培養基或者吹打細胞面就會脫落，不需要胰酶消化。建議使用培養皿培養，更適合吹打細胞操作，吹打細胞注意盡量輕柔，不要產生過多氣泡以免影響細胞狀態。
三、細胞凍存操作
凍存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規格：200-300萬/ml，1ml每管
凍存方法：
1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；
2.將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管；
3.將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜，第二天轉入液氮保存
注意事項：凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案
Tips：
1.細胞懸浮圓形生長，小聚團也有部分散開生長；
2.圓形透亮、細胞膜完整的細胞是活細胞，如果無法判斷，可以取少量細胞用臺盼藍染色后計數確定細胞活率；
3.懸浮細胞密度維持1E5-5E5/ml之間，密度過低或者過高可能會影響細胞狀態；
我們推薦使用尚恩生物NB-4（人急性早幼粒白血病細胞）*培養基（產品貨號：SNLM-175）作為體外培養的培養基。
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