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游離脂肪酸對非洲綠猴腎細胞凋亡的影響

閱讀:1310      發(fā)布時間:2021-9-24
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  非洲綠猴腎細胞被成功的用來培養(yǎng)狂犬病疫苗、乙腦疫苗等多種疫苗,在非典期間又為研究冠狀病毒做出貢獻,在醫(yī)藥研究種廣泛應用。
  非洲綠猴腎細胞探討脂肪酸對細胞生長的影響。利用不同種類不同濃度脂肪酸處理體外培養(yǎng)細胞,利用光鏡觀察細胞形態(tài),后經Hoechst/PI熒光染色和染色體DNA梯度電泳觀察細胞形態(tài)改變并確定細胞凋亡;同時應用蛋白免疫印跡反應檢測淘亡相關Bc1-2、Bax、Fas、P53和Caspase-3蛋白質表達水平。實驗結果:
  (1)光鏡觀察顯示:細胞經脂肪酸處理后有形態(tài)上的改變,細胞產生不同程度的破損,這種損壞程度隨脂肪酸濃度遞增而加強。
  (2)Hoechst/Pl染色表明:飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸都可劑量依賴性的引起Vero細胞凋亡。隨濃度升高,PI著色加深,染色質邊集;Hoechst著色漸淡。
  (3)DNA凝膠電泳顯示:經脂肪酸處理的細胞DNA呈明顯的梯度分子條帶,表現為典型的凋亡現象,此現象隨處理濃度加大而加重。
  (4)Western-blot分析結果表明:脂肪酸處理的細胞中,Bcl-2、Bax、Fas、Caspase-3蛋白表達量發(fā)生改變,其中Bax、Fas蛋白表達量隨濃度增加而顯著上調,同時,Bc1-2蛋白含量有所降低;另外,飽和脂肪酸處理組中P53蛋白表達并無太大差異,而不飽和脂肪酸組P53含量以劑量依賴性上升。
  實驗結果表明,隨著脂肪酸濃度的升高,Vero細胞的凋亡程度有所增加,有明顯凋亡現象。由于Bcl-2、Bax、Fas、Caspase-3和P53蛋白表達發(fā)生變化,提示,這些相關基因在脂肪酸誘導的Vero細胞凋亡過程中起到了重要的作用。

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