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多肽蛋白分析在使用時(shí)需要注意哪些
閱讀：785 發(fā)布時(shí)間：2023-1-31
多肽蛋白分析產(chǎn)品實(shí)例：脫氫睪丸激素、腺(嘌呤核)苷、縮二氨酸、抗菌素、糖肽、人胰生長激素、胰蛋白酶抑制劑、β-乳球蛋白、尿酸、免疫球蛋白、類葉紅素、人胰島素B鏈、賴氨酸、蘇氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等產(chǎn)品的分離純化。
多肽蛋白分析會(huì)遇到的問題：
1、多肽樣品在新的硅膠基質(zhì)色譜柱上不出峰或者峰面積異常小，這是為什么？
這是因?yàn)槿嗫浊蛐喂枘z柱上的非特異吸附位點(diǎn)對(duì)多肽產(chǎn)生死吸附從而導(dǎo)致不出峰。
色譜柱中非特異性吸附位點(diǎn)主要來源于殘留的硅醇基、硅膠中的殘留重金屬、鍵合相脫落后暴露的硅羥基，柱管內(nèi)壁沒有被鈍化的位點(diǎn)。這些都會(huì)對(duì)多肽樣品有較強(qiáng)的非特異性吸附。
其實(shí)在開始使用新色譜柱時(shí)，對(duì)生物樣品這樣的非特異性吸附會(huì)比較嚴(yán)重，可以對(duì)色譜柱進(jìn)行高濃度樣品飽和處理。在正式檢測(cè)前預(yù)*樣，使樣品在柱子上累積，覆蓋住這樣的位點(diǎn)，才會(huì)使我們以后的分析有好的色譜圖。建議隔一分鐘進(jìn)一次樣，連續(xù)進(jìn)十幾針，用過量樣品覆蓋掉非特異性吸附位點(diǎn)。等峰面積，峰形穩(wěn)定后就可以正式檢測(cè)樣品。
2、檢驗(yàn)多肽的色譜柱出現(xiàn)柱壓升高，柱效下降該如何解決？
日常對(duì)色譜柱沖洗維護(hù)可以遵循色譜柱出廠說明書，但是在分析多肽等蛋白質(zhì)樣品時(shí)還容易出現(xiàn)一種現(xiàn)象：蛋白污染。主要是柱頭端填料出現(xiàn)結(jié)塊，如果出現(xiàn)蛋白污染，建議使用乙腈-水-三fu乙酸 = 50-50-0.1小流速反向沖洗60倍柱體積或者反向沖洗過夜。