OverExpress C43(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86081-01(10×100ul)/BFNC8081-02(50×100ul)

OverExpress C43(DE3)：                            100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                             -80℃（6個(gè)月）

基因型

F^–ompT hsdS_B (r_B^- m_B^-) gal dcm (DE3)

產(chǎn)品說明

OverExpress C43(DE3)、OverExpress C41(DE3)兩個(gè)菌株均起源于BL21(DE3)，其優(yōu)點(diǎn)是可以高效表達(dá)毒性蛋白或疏水性蛋白。OverExpress C41(DE3)跟BL21(DE3)的區(qū)別在于其基因組含有至少一個(gè)未知突變，這個(gè)未知突變使其獲得了高效表達(dá)毒性蛋白 (1-5)的能力，此突變位點(diǎn)參與大腸桿菌表達(dá)毒性蛋白時(shí)的細(xì)胞死亡途徑；OverExpress C43(DE3)來源于OverExpress C41(DE3)，是通過篩選OverExpress C41(DE3)對(duì)另一個(gè)不同毒性蛋白的抗性菌株獲得。OverExpress C43(DE3)菌株具有比OverExpress C41(DE3)更強(qiáng)的表達(dá)毒性蛋白和疏水性蛋白的能力，所以說OverExpress C43(DE3) 菌株與BL21(DE3)相比擁有至少兩個(gè)未知突變，正是這兩個(gè)未知突變使其獲得了更廣泛的表達(dá)毒性蛋白或疏水性蛋白的能力。此菌株含有DE3區(qū)，可同時(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。

青旗生物生產(chǎn)的OverExpress C43(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. OverExpress C43(DE3)感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生  素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

OverExpress C43(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞盡量在冰上融化。

2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

4. 誘導(dǎo)時(shí)，IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

5. 為獲得需要量的蛋白，誘導(dǎo)時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化.