細胞凍存和復蘇常見問題！

時間：2023/12/5閱讀：1319

凍存細胞一般常用胎牛血清（FBS)和二甲基亞砜（DMSO）。血清是維持細胞生存環境；DMSO是冷凍保護劑，使細胞免受低溫冰晶形成、及滲透壓改變而導致的物理損傷；

細胞培養理論上基本建議的是兩種：70%培養基 + 10%DMSO+ 20%胎牛血清或者10%DMSO+ 90%胎牛血清。

但經過有些實驗室經過對比發現："10%的DMSO，90%的血清"復蘇效果相對比"70%培養基 + 10%DMSO+ 20%血清"好。

DMSO產品咱就不多說了，什么品牌都有，只要是選擇細胞培養級別的，效果應該差不多。不過我用的是MP Biomedicals二甲基亞砜（DMSO），效果還可以。

對于胎牛血清的選擇就要相對謹慎了，市面上胎牛血清品牌可以說是魚龍混雜，剛看過新聞的客戶就會知道，高仿產品橫行。慎重起見，給大家推薦CellMax品牌胎牛血清，目前有澳洲血清（庫存緊張）和中國血源胎牛血清可供大家試用，購買。

細胞凍存和復蘇需要注意哪些呢？

1、細胞本身的狀態

一般情況下細胞的復蘇還與原代細胞的活性有關，如果要凍存的細胞懸液本身活性不高的話，后面復蘇的存活率也不高。

2、凍存細胞數量要足夠

無論你再怎么小心，細胞在冷凍和復蘇的時候都是最脆弱的，總會死掉一批。所以，一開始就要保證凍存細胞的數量足夠。

3、慢凍快融

一般情況下，細胞凍存時要遵循“慢凍快融"的原則。標準的降溫速度是1-2℃/min ，當溫度到達-25℃，降溫速度可加快至5-10℃/min，到-80℃可直接入液氮。有些實驗室是梯度凍存：4度，-20，-80，液氮，依次凍存。而復蘇速度越快越好。從液氮罐里取出來之后，迅速放在37°C水浴中，盡快融化

4、注意安全

細胞凍存和復蘇是細胞培養技術里面最容易出事的部分。凡是和液氮接觸的操作，注意戴保護眼鏡和手套。注意：復蘇的時候，在水浴中搖搖動的時候會有爆炸的可能性。另外， DMSO是有毒致癌的。接觸的時候一務必要帶好手套。

5、做好標記

對于凍存細胞，一定要做好標記。如：細胞名稱、代數和凍存日期。特別是公共實驗室，更要做好標記，避免找不到自己的細胞。

6、DMSO是否去除

由于DMSO是一種有毒致癌物質。那么，解凍之后，應不應該去除凍存液中的DMSO呢？答案是no。除了極少數特別注明的對DMSO敏感的細胞外，99%的細胞都不需要去除DMSO。后面細胞培養中頻繁換液會慢慢去除掉DMSO。

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