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技術文章

尼氏染色科研實驗技術服務

閱讀:235          發(fā)布時間:2024-9-26
尼氏染色


尼氏染色
       尼氏染色發(fā)明于1892年,是根據(jù)它的發(fā)明人德國科學家Franz Nissl命名的。細胞的DNA和RNA帶負電荷,這是因為它們分別是脫氧核糖核苷酸和核糖核苷酸組成。以脫氧核糖核苷為例,它由堿基、脫氧核糖和磷酸構成。 其中的磷酸使DNA和RNA帶負電荷、呈酸性。尼式染色正是利用了DNA、RNA酸性的特征,用堿性的染料(比如,甲酚紫、甲苯胺藍)去綁定DNA和RNA,從而將細胞著色。尼氏染色的部位主要是DNA聚集的細胞核,內質網(wǎng),特別是粗面內質網(wǎng),其上的核糖體包含的核糖體RNA占細胞RNA總量的80%以上。粗面內質網(wǎng)也因為是尼氏染色顯著的染色位點而被稱為尼氏體。
技術原理
       神經(jīng)元細胞體包括一個具有皺褶核膜的大細胞核、稀疏的染色質和一個明顯的核仁。在細胞體中細胞質是尼氏顆粒,即能夠代表粗面內質網(wǎng)并在很多神經(jīng)元中產(chǎn)生特異的斑點狀嗜堿性表現(xiàn)的嗜堿性顆粒。尼氏顆粒可以用很多染色來顯示如中性紅、亞甲基藍、甲苯胺藍和甲基紫等。染色的變異、pH和分化的時間使一些染色既可以僅突出尼氏物質,也可以顯示神經(jīng)元的細胞核和神經(jīng)膠質。各種神經(jīng)細胞內都含有尼氏體,但其形狀、數(shù)量、分布位置常常不同。尼氏體也存在于樹突中,但不在于軸突和胞體的軸丘。尼氏體會因為生理狀態(tài)的變化而變化,尼氏體是神經(jīng)元內合成蛋白質合成的重要部位,當神經(jīng)元受到刺激后,胞體內的尼氏體會明顯減少。通常尼氏體能被堿性染料如硫堇、亞甲藍、甲苯胺藍和焦油紫等染料染成紫藍色。
實驗流程

實驗結果展示:


 
注意事項:
       1、切片若為石蠟切片,要在二甲苯中先脫蠟。
       2、焦油紫或硫堇的染色時間也是根據(jù)染液配制時間的新舊、切片厚度和環(huán)境溫度靈活掌握。
       3、應該在顯微鏡下觀察分色程度,使尼氏小體呈深色而背底基本無色為最佳。如分色不夠,可以退回酒精再次分色。如分色過度,也可退回再染。
       4、尼氏染色應充分脫水,否則容易褪色。
       5、HE染色方法雖然也能觀察到胞質中嗜堿性顆粒,但結構不甚清晰,神經(jīng)元的軸突、樹突難以辨認。在尼氏染色中尼氏體清晰可辨,而且很容易區(qū)分軸突和樹突。尼氏染色中尼氏體受染后呈塊狀(形如虎斑)或顆粒狀,核周圍尼氏體顆粒較大,近邊緣處較小而細長,如在生理情況下,尼氏體大而數(shù)量多,反映神經(jīng)細胞合成蛋白質的功能較強,在神經(jīng)元受損時,尼氏體的數(shù)量可減少甚至消失。


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