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詳細介紹
產品簡介
Rosetta 2(DE3) pLysS 來源于 Rosetta(DE3)，本菌株含有 pLysSRARE2 質粒，除了能夠提供原
Rosetta(DE3)宿主菌含有 的 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六個稀有密碼子的 tRNA 外，還
提供了第七個稀有密碼子 CGG 的 tRNA。Rosetta2(DE3)pLysS 載體通過提供稀有密碼子，使得該宿
主菌相對于其他大腸桿菌，能夠提供更加“通用"的蛋白質表達，從而提升目的蛋白表達水平。DE3
是溶源性的 λDE3, 所以帶有 T7 RNA 聚合酶的染色體拷貝，故而適用于 pET 系列載體及其他 T7 啟
動子系列載體。該菌株含有 pLysSRARE2 質粒，除了提供稀有密碼子外還能夠產生 T7 溶菌m，可
以有效降低目的基因的基礎表達水平。同時，pLysSRARE2 質粒具有氯m素抗性。此外，
pLysSRARE2 質粒的起始復制位點是 p15 Origin, 這使得該質粒能夠和 pUC-及 pBR322-衍生的質粒
互相共存。經 pUC18 質粒轉化檢測， Rosetta 2 (DE3)pLysS 感受態細胞的轉化效率可達 108 cfu/μg
DNA 以上。
產品組成
組分
Rosetta 2(DE3)pLysS
化學感受態細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm (DE3) pLysSRARE2 (CamR)
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除 pLysSRARE2 外，無外源質粒 DNA 殘留；
化學法轉化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90s 后，立刻置于冰浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養基（室溫或 37 ℃預熱），后置于 37 ℃搖床復壯 45 min；
5. 取不同體積的轉化產物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養箱培養過夜。
注意事項
1. 感受態細胞冰浴中解凍后應立即使用；
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10；
3. 加入待轉化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態細胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優良轉化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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