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詳細介紹
產品簡介
Rosetta-gami 2 系列菌株是集合了 Rosetta 2 系列菌株和 Origami 2 系列菌株的優點；Rosetta-gami 2
(DE3)系列菌株是來源于 Origami 2，帶有溶源性的 λDE3，可表達 T7 RNA 聚合酶。該菌株攜帶有
trxB 和 gor 基因突變，從而提高了含二硫鍵正確折疊蛋白的表達效率。該菌株中帶有的
pLysSRARE2 質粒（攜帶氯m素抗性），除了能夠提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有 的 AUA, AGG,
AGA, CUA, CCC, 和 GGA六個稀有密碼子的 tRNA外，還提供了第七個稀有密碼子 CGG 的 tRNA，
因而能夠提高真核蛋白在大腸桿菌中的表達水平。Rosetta-gami 2(DE3)感受態細胞具有四環素抗性，
不含卡納抗性，適用于 pET 系列載體及其他 T7 啟動子系列載體。pLysSRARE2 質粒可表達 T7 溶菌
m，可以有效降低目的基因的基礎表達水平。經 pUC18 質粒轉化檢測，Rosetta-gami 2 (DE3) pLysS
感受態細胞的轉化效率可達 107 cfu/μg DNA 以上。
產品組成
組分
Rosetta-gami 2 (DE3) pLysS
化學感受態細胞
10 × 100 μL
100 ×100 μL
定制
基因型：Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F′[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10
trxB pLysSRARE2 (CamR, StrR, TetR)
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除 pLysSRARE2 質粒外，無外源質粒 DNA 殘留；
化學法轉化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養基（室溫或 37 ℃預熱），后置于 37 ℃搖床復壯 45 min；
5. 取不同體積的轉化產物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養箱培養過夜。
注意事項
1. 感受態細胞冰水浴中解凍后應立即使用；
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10；
3. 加入待轉化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態細胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優良轉化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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