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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Rosetta-gami B 系列菌株來(lái)源于 Origami B 系列菌株，是集合了 BL21 系列、Rosetta 系列菌株和
Origami 系列菌株的優(yōu)點(diǎn)。該系列菌株攜帶有 trxB 和 gor 基因突變，可以高效表達(dá)含二硫鍵的蛋白；
此外，由于能夠提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有 的 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六個(gè)稀有
密碼子的 tRNA，因而能夠提高真核蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)水平。該菌株含有氯m素、卡那和四
環(huán)素抗性，所以無(wú)法轉(zhuǎn)化含這些抗性的質(zhì)粒，但是可以用于氨芐抗性和壯觀m素抗性質(zhì)粒的原核
表達(dá)。Rosetta-gami B(DE3) pLysS 可高效表達(dá) T7 RNA 聚合酶，因而適用于 pET 系列載體及其他 T7
啟動(dòng)子系列載體。含有的 pLysSRARE 質(zhì)?？梢员磉_(dá) T7 溶j酶來(lái)有效降低目的基因的本底表達(dá)水
平。pLysSRARE 質(zhì)粒的起始復(fù)制位點(diǎn)是 p15 Origin，其可以與 pUC-及 pBR322-衍生的質(zhì)?；ハ喙?/span>
存。經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測(cè)，Rosetta-gami B (DE3) pLysS 感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107 cfu/μg
DNA 以上。
產(chǎn)品組成
組分
Rosetta-gami B (DE3) pLysS
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F– ompT hsdSB (rB– mB–) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pLysSRARE (CamR, KanR, TetR)
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除 pLysSRARE 質(zhì)粒外，無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激 90s 后，立刻置于冰浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過(guò)程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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