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操作步驟:

1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
2）根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。
3）加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4）甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6）甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8）取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
9）在450nm波長處測定各孔的OD值。

試劑和樣本的控制方法：
一、試劑
1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關，我司嚴格按照進行，已獲得國家承認的“三證"，每一個產品都有對應的批號，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產品，不必擔心會有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應微孔內的溫度較快地達到所需的溫度，以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內源性干擾因素：包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；
類風濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標本用聯有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測抗原時，可用加入到標本稀釋液中使RF降解；
補體的控制方法：
①用EDTA稀釋標本；
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活；
2.外源性干擾因素：包括標本溶血、細菌污染、保存時間過長或凝固不全等；
控制方法：采血時規范操作，采集的血液勿用力震蕩，以防溶血；收集標本時采用無菌試管，經檢測后再低溫凍存；保存時間不宜過久，檢測時盡量采用新鮮標本；對于凝固不全的血標本可適當加入抗凝劑，并放入37℃水中1 h，待充分凝固后再離心分離血清。

具有如下優點：
一、高效、靈敏、特異的抗體；
二、穩定的重復性和可靠性；
三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型；
五、性價比非常好，節省實驗經費。

APT(Abnormalprothrombin)ELISAKit人異常凝血酶原CAS:59891進口、國產規格：500mg

CIC(circulatingimmunecomplex)ELISAKit人循環免疫復合物CAS:501進口、國產規格：1.5ml×3ampules

PA-IgM(Plateletassociatedantibody)ELISAKit人血小板相關抗體IgMCAS:840574進口、國產規格：100mg

FPA(fibrinopeptideA)ELISAKit人血纖肽/纖維蛋白肽ACAS:505進口、國產規格：20mg

Plg(Plasminogen)ELISAKit人纖溶酶原CAS:進口、國產規格：10mg

CTLA/CD152(cytotoxicTlymphocyteassociatedantigen4)ELISAKit人細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4CAS:2521869進口、國產規格：10mg

Lambda-IgLC(lambdaimmunoglobulinlightchain)ELISAKit人免疫球蛋白輕鏈lambdaCAS:46188進口、國產規格：750mg

pMHC(peptidemajorhistocompatibilitycomplex)ELISAKit人肽-主要組織相容性復合體復合物CAS:進口、國產規格：200mg

CLA(cutaneouslymphocyte-associatedantigen)ELISAKit人皮膚淋巴細胞相關抗原CAS:1346787進口、國產規格：200mg

T-TM(thrombinthrombomodulincompound)ELISAKit人凝血酶血栓調節蛋白復合物CAS:進口、國產規格：10mg

Hc(Hemolyticcomplement)ELISAKit人溶血補體CAS:進口、國產規格：10mg

TCR(Tcellreceptor)ELISAKit人T細胞受體CAS:80064進口、國產規格：20g

LAC/LA(lupusanticoagulant)ELISAKit人狼瘡抗凝抗體CAS:80273進口、國產規格：5g

solublefibrinmonomercomplex,SFMCELISAKit人可溶性血纖蛋白單體復合物CAS:1035775進口、國產規格：150mg

sreumalbumin,HSAELISAKit人血清白蛋白CAS:1319269進口、國產規格：25mg
MMP-13 elisa試劑盒鴨腳樹葉，鴨腳樹葉醛MESG *Phosphate assay reagent*NAD線粒體呼吸鏈復合物I檢測試盒

鴨嘴花酚，鴨嘴花粉 PhosphoWorks™ phosphatidylserine reagent *Blue fluorescence*  equol煙酰胺腺嘌呤二核苷檢測試盒

鴨嘴花PhosphoWorks™ phosphatidylserine reagent *Green fluorescence*  CRG雌馬酚檢測試盒

鴨嘴花酮PhosphoWorks™ phosphatidylserine reagent  *Red fluorescence* Brucella-Ab大豆異黃酮檢測試盒

胭脂Calcein   NADH布氏桿菌抗體檢測試盒

延胡索單酚Calcein, AM  NADHD-II還原型輔酶Ⅰ檢測試盒

測定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣，不能加在管壁上
4.加樣時不能產生氣泡
2.溫浴
1.加標本后和加結合物后，應立即放入按規定的反應溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應疊在一起。
3.為避免蒸發，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟，但卻 是決定實驗成敗的關鍵。
2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。