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產品名稱：大鼠眼動脈內皮細胞

組織來源：眼動脈

產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

培養信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養基：基礎培養基，含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：內皮細胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠眼動脈內皮體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的優良培養狀態。

細胞簡介：

大鼠眼動脈內皮分離自眼動脈組織，眼動脈是眼眶及內容物最主要的血液供應，是頸內動脈主要分枝，也是交通顱內外血管的重要通道。有研究結果認為，絕大多數眼動脈起源于ICA剛出海綿竇處，且多數起源于ICA床突上段內上壁，少數起源于上壁，少數眼動脈可起源于ICA海綿竇段及腦膜中動脈。眼動脈的走行分為顱內段、管內段及眶內段，眼動脈在管內段一般行走于視神經上方，顱內段和眶內段再分為五段：1、短臂；2、A角；3、長臂；4、B角；5、遠側部。眼動脈進入眶內后沿視神經向下外側走行，終止于眶孔的上內側角。眼動脈的分枝一般分為眼組、眶組及眶外組。眼組分為視網膜中央動脈睫前動脈及眼球的脈絡叢；眶組分為淚腺動脈和肌動脈；眶外組分為篩后動脈、篩前動脈、眶上動脈、瞼內側動脈、鼻背動脈(終末枝)。眼動脈內皮細胞是覆蓋在眼動脈內面的單層細胞，可分泌一系列血管活性物質而保持血管穩態，當其受到炎癥或其它因素刺激后穩態被破壞而導致一些血管疾病的發生。因此，眼動脈內皮細胞已成為研究眼部血管疾病發病機制及治療藥物的工具。內皮細胞或血管內皮是一薄層的專門上皮細胞，由一層扁平細胞所組成。它形成血管的內壁，是血管管腔內血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口。內皮細胞是沿著整個循環系統，由心臟直至最小的微血管。眼動脈供應整個眼球、眼球附屬器及部分附近組織的營養。眼動脈可發生痙攣、血栓、栓塞及出血等，均可嚴重影響視力。頸內動脈眼動脈瘤簡稱眼動脈瘤，又稱床突旁動脈瘤或頸內動脈腹側動脈瘤。眼動脈瘤是位于眼動脈和后交通動脈之間的動脈瘤，占全部顱內動脈瘤的0.47%～9.26%，30%～70%患者表現為SAH，1/3有視功能損傷，如視力減退、視野缺損和視神經等。體外培養的眼動脈內皮細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡介：

實驗室分離的大鼠眼動脈內皮采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法、并通過內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的大鼠眼動脈內皮經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養步驟：

一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。

b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。
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收到細胞如何處理？

1、首先，觀察細胞培養瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯系（所拍照片將作為后續服務依據）。

2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養瓶蓋，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時，以便穩定細胞狀態。

3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態（所拍照片將作為后續服務依據）；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。

5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養瓶內培養基，預留5ml左右繼續培養，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細胞：將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養，補加培養基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續培養，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作