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FISH(fluorescence in situ hybridization)技術是一種重要的非放射性原位雜交技術。基本原理:如果被檢測的染色體或DNA纖維切片上的靶DNA與所用的核酸探針是同源互補的,二者經變性-退火-復性,即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。
熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization, FISH)是在20世紀80年代末在放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性分子細胞遺傳技術,以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法,探針首先與某種介導分子(reporter molecule)結合,雜交后再通過免疫細胞化學過程連接上熒光染料。FISH的基本原理是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標記,然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上,再用與熒光素分子偶聯的單克隆抗體與探針分子特異性結合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析。
基本步驟:
1. 玻片的準備和樣品固定
2. 細胞或組織的預滲透處理
3. 靶DNA變性(DNA原位雜交)
4. 探針制備
5. 原位雜交過程
6. 雜交后洗滌
7. 探針(顯色)檢測
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