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CHIP-seq,指的是結合位點分析法,作用為研究體內蛋白質與DNA相互作用。染色質免疫共沉淀技術(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)也稱結合位點分析法,是研究體內蛋白質與DNA相互作用的有力工具,通常用于轉錄因子結合位點或組蛋白特異性修飾位點的研究。
將ChIP與第二代測序技術相結合的ChIP-Seq技術,能夠高效地在全基因組范圍內檢測與組蛋白、轉錄因子等互作的DNA區段。ChIP-Seq的原理是:首先通過染色質免疫共沉淀技術(ChIP)特異性地富集目的蛋白結合的DNA的片段,并對其進行純化與文庫構建;然后對富集得到的DNA的片段進行高通量測序。研究人員通過將獲得的數百萬條序列標簽精確定位到基因組上,從而獲得全基因組范圍內與組蛋白、轉錄因子等互作的DNA區段信息。
ChIP-Seq與傳統的ChIP-chip技術相比具有靈敏度高、靈活性強、分辨率高、不具備其他芯片相關負效應等明顯優勢。
該技術流程主要分為兩部分:實驗數據獲取及生物信息分析。
實驗數據獲取流程:
1. 將蛋白交聯到DNA上。以保證蛋白和DNA能夠結合,找到互作位點。
2. 通過超聲波剪切DNA鏈。
3. 加上附上抗體的磁珠用于免疫沉淀靶蛋白。
4. 接觸蛋白交聯;純化DNA
5. 定量檢測,檢測合格后進行測序文庫構建、 DNA 成簇(Cluster generation)擴增、高通量測序。
生物信息分析流程見下圖:
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