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用于去除 GST 標(biāo)簽的 PreScission 蛋白酶

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用于去除 GST 標(biāo)簽的 PreScission 蛋白酶PreScission 蛋白酶PreScission 蛋白酶是人鼻病毒 (HRV) 3C 蛋白酶和 GST 的融合蛋白。可一步完成 GST 標(biāo)簽的層析柱上裂解和蛋白純化。 PreScission 蛋白酶應(yīng)用用于將 GST 標(biāo)簽與使用 pGEX-6P 載體表達(dá)的蛋白進(jìn)行位點(diǎn)特異性分離酶切緩沖液50 mM Tris-HCl、150 mM NaCl、1 mM 乙二胺四乙酸 (EDTA)、1 mM 二硫蘇糖醇 (DTT)、pH 7.0洗脫緩沖液50 mM Tris-HCl、10 mM 還原型、pH 8.0抑制劑100 mM ZnCl2(50% 抑制率);100 µM 抑制素;4 mM Pefabloc分子量 (Mr)46000供應(yīng)方式2000 單位/ml(833 ~ 1000 單位/mg)的 50 mM Tris-HCl (pH 8.0)、150 mM NaCl、10 mM 乙二胺四乙酸、1 mM DTT 和 20% 甘油溶液。單位定義溫度為 5°C、pH 為 7.0 的條件下培養(yǎng) ......
PreScission 蛋白酶是人鼻病毒 (HRV) 3C 蛋白酶和 GST 的融合蛋白。可一步完成 GST 標(biāo)簽的層析柱上裂解和蛋白純化。
  • 識(shí)別 LeuGluValLeuPheGln/GlyPro 序列并在Gln 殘基與 Gly 殘基之間進(jìn)行特異性酶切。
  • 省時(shí)——可以酶切 GST 標(biāo)簽蛋白,同時(shí)仍與親和層析填料結(jié)合。
  • 孵育溫度低——能夠低溫酶切包含 HRV 3C 蛋白酶識(shí)別序列的融合蛋白。

層析柱上或?qū)游鲋饷噶呀?/h2>

當(dāng)融合蛋白仍與 Glutathione Sepharose 4B、Glutathione Sepharose High Performance 或 Glutathione Sepharose 4 Fast Flow 親和層析填料結(jié)合時(shí),只需一步即可去除 GST 標(biāo)簽和蛋白酶。另一個(gè)選擇是使用還原型洗脫帶 GST 標(biāo)簽的蛋白質(zhì),裂解,然后使樣品通過(guò)相同的層析填料以去除蛋白酶和標(biāo)簽。

與其他常規(guī)蛋白酶(例如和 Xa 因子)不同,這種帶 GST 標(biāo)簽的融合蛋白可以通過(guò)結(jié)合對(duì) GST 具有親和力的層析填料而輕松去除。其他非重組蛋白質(zhì)酶需要使用不同的層析填料進(jìn)行額外的純化步驟。

編碼 HRV 3C 蛋白酶識(shí)別序列的載體

pGEX-6P 載體 pGEX-6P-1、pGEX-6P-2 和 pGEX-6P-3 編碼此 3C 蛋白酶的識(shí)別序列。

成功用于已發(fā)表研究

PreScission 蛋白酶在多種研究應(yīng)用中用于執(zhí)行酶切,包括:

  • 泛素化蛋白中所涉及蛋白的層析柱上裂解和純化
  • 從包涵體中對(duì)帶 GST 標(biāo)簽的蛋白質(zhì)進(jìn)行裂解和純化,用以研究丙型肝炎病毒離子通道復(fù)合物的形成

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