化工儀器網(wǎng)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Terragene北京代 Terragene北京z代理 Terragene 天津z代理 Terragene深圳z代理 Terragene 上海z代理 Terragene湖北z代理 Terragene湖南z代理 Terragene江蘇z代理 Terragene河南z代理 Terragene河北z代理 Terragene石家莊z代理 Terragene深圳z代理 Terragene上海代理
詳細(xì)介紹
Terragene上海代理 Terragene上海代理
品牌是Terragene Terragene北京z代理 Terragene 天津z代理 Terragene深圳z代理 Terragene 上海z代理 Terragene湖北z代理 Terragene湖南z代理 Terragene江蘇z代理 Terragene河南z代理 Terragene河北z代理 Terragene石家莊z代理 Terragene深圳z代理 Terragene廣東z代理
所有推薦的檢測(cè) - 捕獲抗體對(duì)都能以相同效率識(shí)別 BNP 前體（圖中未展示）。然而，重要的是要注意，市售 BNP 檢測(cè)試劑對(duì) proBNP 的識(shí)別能力存在 18 - 20 倍的差異，因此，所有推薦的組合都已在一組 11 例 HF（心力衰竭）患者的血漿樣本中進(jìn)行了測(cè)試，以確保檢測(cè)對(duì) proBNP 具有同等識(shí)別能力。這一點(diǎn)在使用不同檢測(cè)平臺(tái)時(shí)尤為重要，因?yàn)樾枰x擇在給定條件和平臺(tái)下能最佳發(fā)揮作用的抗體對(duì)。
對(duì)于 BNP 免疫檢測(cè)，我們建議使用重組糖基化 proBNP（C 端 + N 端 GBPs，見第 8 節(jié)）作為標(biāo)準(zhǔn)品，因?yàn)檠褐?span> BNP 的前體主要以糖基化 proBNP 的形式存在。
校準(zhǔn)曲線：所有推薦的 BNP 免疫檢測(cè)都能識(shí)別三種具有相同效率的 BNP 前體多肽：合成 BNP、重組非糖基化 proBNP 和重組糖基化 proBNP。圖 5 展示了 9M1 - 24C5（A）和 5T4 - 12（B）兩種基于抗體的免疫檢測(cè)的代表性校準(zhǔn)曲線。我們之前已詳細(xì)描述過 9M1 - 24C5 免疫檢測(cè)，并在內(nèi)部測(cè)試中證明了其分析靈敏度（使用合成 BNP 作為校準(zhǔn)品時(shí)）優(yōu)于 0.05 pg/ml（圖 7D）。其他抗體對(duì)的分析靈敏度也列于下文的識(shí)別部分。
BNP 表位與市售 BNP 檢測(cè)試劑的表位具有良好的相關(guān)性：為了確定推薦的 BNP 免疫檢測(cè)所識(shí)別的表位是否與市售檢測(cè)試劑識(shí)別的表位相似，我們比較了兩種市售檢測(cè)試劑（Alforti STAT BNP 檢測(cè)試劑，表位為 36 - 24 和 5 - 13；Siemens 檢測(cè)試劑，表位為 26 - 12 和 12 - 2）以及我們的 9M1 - 2429 檢測(cè)試劑（分別針對(duì) 26 - 12 和 12 - 2 表位）的識(shí)別情況。具有相同表位特異性的檢測(cè)試劑的檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性良好。用 BNP 免疫檢測(cè)（9M1 - 2429）獲得的檢測(cè)結(jié)果與 Alforti STAT BNP 檢測(cè)試劑（圖 6A）和 Siemens BNP 檢測(cè)試劑（圖 6B）的檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性良好。使用針對(duì) 26 - 12 和 12 - 2 表位的檢測(cè)試劑獲得的結(jié)果與針對(duì) 37 - 24 和 14 - 21 表位的 Siemens 檢測(cè)試劑（圖 6B）的結(jié)果相關(guān)性良好。我們的一種檢測(cè)試劑（5M1 - 130）與 Siemens 檢測(cè)試劑（r = 0.97）也顯示出良好的相關(guān)性。
每種檢測(cè)試劑都使用內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行校準(zhǔn)。市售檢測(cè)試劑的表位特異性可在 IFCC 網(wǎng)站上查詢。
腦啡肽酶抑制及其對(duì)BNP免疫檢測(cè)的影響
通過阻止內(nèi)源性BNP的降解來增加其水平，被認(rèn)為是心力衰竭（HF）治療的一種潛在策略。最近，一種名為Entresto®（“諾欣妥"，譯者注 ）的藥物已獲批準(zhǔn)用于HF治療。該藥物的活性成分之一是腦啡肽酶抑制劑，有觀點(diǎn)認(rèn)為，給HF患者使用這種抑制劑，會(huì)使BNP前體肽（proBNP）相關(guān)分子的水平升高 。
市售BNP檢測(cè)試劑的設(shè)計(jì)通?；谧R(shí)別兩種表位的抗體對(duì)，至少其中一種表位針對(duì)BNP分子的C端結(jié)構(gòu)，另一種表位針對(duì)BNP環(huán)結(jié)構(gòu)（見圖2中的17 - 118序列）。鑒于腦啡肽酶切割位點(diǎn)位于環(huán)結(jié)構(gòu)，合理推測(cè)識(shí)別環(huán)結(jié)構(gòu)表位的免疫檢測(cè)抗體，在腦啡肽酶改變proBNP的情況下，可能會(huì)受到影響。然而，HF患者中proBNP的復(fù)雜多樣性，以及心臟分泌的proBNP活性形式的多樣性，意味著這個(gè)問題沒有簡(jiǎn)單答案。
我們研究了腦啡肽酶活性對(duì)多種BNP免疫檢測(cè)的影響，方法是將proBNP暴露于腦啡肽酶。令人驚訝的是，proBNP對(duì)腦啡肽酶具有抗性。3C4 - 3G12對(duì)腦啡肽酶的抗性似乎是由于腦啡肽酶切割表位的抗性。而捕獲抗體識(shí)別環(huán)結(jié)構(gòu)的檢測(cè)試劑，如5T4 - 12，確實(shí)會(huì)因腦啡肽酶切割而受影響，這與預(yù)期一致 。我們發(fā)現(xiàn)5T4 - 12對(duì)腦啡肽酶切割敏感，而5T4 - 32也對(duì)腦啡肽酶作用有抗性（數(shù)據(jù)未展示）。
我們還發(fā)現(xiàn)，未經(jīng)過處理的proBNP（它是BNP免疫檢測(cè)中主要的待測(cè)分子形式）實(shí)際上不會(huì)被腦啡肽酶切割，因此，僅設(shè)計(jì)用于檢測(cè)BNP的試劑，不會(huì)受到此類藥物（指腦啡肽酶抑制劑類藥物 ）的影響 。
NT - proBNP檢測(cè)試劑的研發(fā)
NT - proBNP是proBNP的N端部分，包含76個(gè)氨基酸，有7個(gè)糖基化位點(diǎn)。已發(fā)現(xiàn)NT - proBNP的生物活性僅為BNP的1/1000，這在一定程度上意味著，在臨床樣本中，NT - proBNP更穩(wěn)定。計(jì)算得出的NT - proBNP等電點(diǎn)為8.45，分子質(zhì)量為8.54 kDa。但由于糖基化，其表觀分子質(zhì)量更高 。
糖基化對(duì)NT - proBNP檢測(cè)的影響
我們的研究表明，NT - proBNP的糖基化會(huì)對(duì)某些抗體的識(shí)別產(chǎn)生負(fù)面影響。NT - proBNP分子的中央?yún)^(qū)域（如28 - 56位）因去糖基化而容易被抗體識(shí)別，而13 - 27位和61 - 76位區(qū)域的糖基化則已被充分認(rèn)識(shí) 。
為了減少糖基化對(duì)NT - proBNP測(cè)量的影響，我們使用了來自8例HF患者的樣本，這些樣本在去糖基化前后，分別用兩種檢測(cè)試劑進(jìn)行檢測(cè)：一種檢測(cè)試劑的抗體對(duì)針對(duì)無 糖基化位點(diǎn)（15C4 - 13G12），另一種檢測(cè)試劑的抗體對(duì)針對(duì)糖基化位點(diǎn)（11D1 - 13G12）。圖7顯示，去糖基化對(duì)后一種檢測(cè)試劑的檢測(cè)結(jié)果有顯著影響。
在檢測(cè)NT - proBNP時(shí)，糖基化及其對(duì)檢測(cè)的影響應(yīng)在檢測(cè)試劑研發(fā)過程中予以考慮。建議選擇對(duì)糖基化不太敏感的抗體 。
圖7 糖基化對(duì)NT - proBNP檢測(cè)有不同程度的影響
使用兩種不同的免疫檢測(cè)方法（A為Alforti NT - proBNP檢測(cè)試劑，識(shí)別無 糖基化表位；B為針對(duì)糖基化表位的檢測(cè)試劑 ），對(duì)8例HF患者樣本在去糖基化前后的樣本進(jìn)行檢測(cè)。兩種檢測(cè)試劑在檢測(cè)天然（糖基化）形式（黑色圓點(diǎn)）和去糖基化形式（紅色圓點(diǎn)）的NT - proBNP時(shí)，結(jié)果差異顯著。在A檢測(cè)試劑中，去糖基化幾乎不影響檢測(cè)；而在B檢測(cè)試劑中，去糖基化會(huì)使檢測(cè)信號(hào)大幅改變 。
Terragene北京z代理 terragene天津z代理 terragene代理 terragene上海z代理 terragene促 terragene讓利 terragene廣東z代理 terragene深圳z代理terragene福建z代理 terragene河北z代理 terragene河南z代理 terragene山東z代理 terragene山西z代理 terragene內(nèi)蒙古z代理 terragene安徽z代理 terragene江蘇z代理 terragene江西z代理