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腺病毒(Adenovirus)是一種沒有包膜的直徑為70~90 nm的病毒顆粒,為線狀雙鏈DNA分子,約含35000 bp,兩端各有長約100 bp的反向重復序列。
腺病毒為5型血清型腺病毒,缺失了腺病毒的早期表達基因序列E1區和E3區。E1是腺病毒復制所必須的,E1的缺失使其不能自身復制,只能依靠包裝細胞如HEK293細胞提供的反式互補進行復制擴增,以此保證腺病毒的安全性。E3基因表達的蛋白能對抗宿主的抗病毒防御系統,E3區的去除能減少宿主的體內免疫反應。
腺病毒包裝采用的是AdMax系統,通過Cre-loxp重組酶,使共轉染到HEK293細胞中的腺病毒載體穿梭質粒和骨架質粒(腺病毒基因組質粒)在重組酶的作用下產生重組腺病毒,獲得的病毒滴度更高,其病毒滴度可以達到1×10^12pfu/ml 。
腺病毒載體有CMV、mCMV、CAG、PGK、UbC、EF1a、等多種啟動子可供選擇;而且還有EGFP、ZsGreen、tdTomato、mCherry、EYFP等多種熒光標記蛋白可供選擇。
客戶須知
1. 需客戶提供相關基因信息(基因ID、名稱、序列等)
提供結果
1. 提供完整的實驗流程報告、測序文件、實驗圖片、實驗數據等。
2. 提供腺病毒感染各類細胞的相關實驗,為您提供全面的實驗服務,詳情請咨詢技術支持.
實驗流程
1. 目的基因獲取。
2. 構建腺病毒表達載體。
3. 針對目的基因設計合成siRNA,進行靶篩。
4. 構建腺病毒shRNA載體。
5. 線性化腺病毒載體。
6. 轉染HEK293細胞。
7. 收集細胞裂解液。
8. 感染HEK293細胞,放大培養重組腺病毒。
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