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載體構建（vectorconstruction）是分子生物學研究常用的手段之一。依賴于限制性核酸內切酶、DNA連接酶和其它修飾酶的作用，分別對目的基因和載體DNA進行適當切割和修飾后，將二者連接在一起，再導入宿主細胞，實現目的基因在宿主細胞內的正確表達。載體構建主要包括已有載體多克隆位點MCS的改造和已有載體啟動子、增強子、篩選標記等功能元件的改造。載體構建完成后可利用PCR原理進行測序驗證。
載體構建實驗步驟：
1）引物設計，PCR擴增目的片段
2）酶切目的片段與載體
3）載體構建連接或重組
4）轉化
5）涂板
6）載體構建挑取克隆酶切或PCR鑒定
7）測序驗證
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